丙泊酚不同作用時(shí)間對(duì)新生大鼠離體海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：以體外培養(yǎng)的新生大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞為研究對(duì)象，選用不同作用時(shí)間，丙泊酚對(duì)其進(jìn)行藥物干預(yù)，研究其對(duì)新生大鼠離體海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法：原代培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞：健康出生7d的符合國(guó)家二級(jí)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)的SD新生大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞，體外培養(yǎng)48h后用含1％N2(神經(jīng)生長(zhǎng)因子)添加劑DMEM/F12培養(yǎng)基全量換液，以后每3d半量換液，培養(yǎng)至第7d，取部分正常培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行NSE免疫組織化學(xué)染色，鑒定為海馬神經(jīng)細(xì)胞后進(jìn)行如下實(shí)

2、驗(yàn)。分組與藥物處理：采用隨機(jī)數(shù)字方法，將其隨機(jī)分為8組。P1、2、3、4組為丙泊酚藥物處理組，丙泊酚處理終濃度為12ug/ml，培養(yǎng)至第7d的神經(jīng)細(xì)胞分別進(jìn)行3h、
　　6h、12h、24h干預(yù)，后換成細(xì)胞完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h；C1、2、3、4組為對(duì)照組，不作任何處理，各組培養(yǎng)結(jié)束時(shí)間分別對(duì)應(yīng) P1、2、3、4組。培養(yǎng)結(jié)束后進(jìn)行各組指標(biāo)的測(cè)定：（1）MTT酶標(biāo)法檢測(cè)細(xì)胞存活率；（2）Annexi-V/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞

3、凋亡率；（3）HE染色光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　結(jié)果：（1）海馬神經(jīng)細(xì)胞存活率：C1、2、3、4組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；P1組與 C1組相比，P2組與 C2組相比,細(xì)胞存活率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），P3組與 C3組相比，細(xì)胞存活率差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），P4組與C4組相比，細(xì)胞存活率具有顯著差異性（P＜0.01）；丙泊酚處理組神經(jīng)細(xì)胞存活率隨著藥物處理時(shí)間的增加而下降，P2組與

4、P1組相比，細(xì)胞存活率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；P3組與 P1組，P3組與P2組相比，細(xì)胞存活率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），P4組與P1組，P4組與P2組、P4組與P3相比，細(xì)胞存活率均有顯著差異性（P＜0.01）。(2)海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡率：C1、2、3、4組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；P1組與C1組相比，P2組與C2組相比，細(xì)胞凋亡率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），P3組與C3組相比，細(xì)胞凋亡率差異具

5、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），P4組與C4組相比，細(xì)胞凋亡率具有顯著差異性（P＜0.01）；丙泊酚處理組細(xì)胞凋亡率隨著藥物處理時(shí)間的增加而升高，P2組與P1組相比，細(xì)胞存活率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；P3組與P1組，P3組與P2組相比，細(xì)胞凋亡率差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），P4組與 P1組、P4組與 P2組、P4組與P3組相比均有顯著差異性（P＜0.01）。（3）海馬神經(jīng)細(xì)胞HE染色形態(tài)學(xué)變化：P1組與 P2組和C1、