17β雌二醇對(duì)丙泊酚致發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡及遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶功能障礙的影響及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：17β雌二醇對(duì)丙泊酚致發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響
　　目的：評(píng)價(jià)17β雌二醇能否通過ERK信號(hào)通路改善丙泊酚導(dǎo)致的發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
　　方法：7日齡健康雄性SD大鼠78只，體重11~18g，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為6組（n=13）：二甲基亞砜組（DMSO組），脂肪乳劑組（F組），17β雌二醇組（E組），丙泊酚組（P組），丙泊酚+17β雌二醇組（PE組），丙泊酚+17β雌二醇+U0126組（PEU組）。

2、E組皮下注射600μg/kg17β雌二醇，DMSO組皮下注射與之等容量的DMSO，P組腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，F(xiàn)組腹腔注射與之等容量脂肪乳劑，PE組腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，皮下注射600μg/kg17β雌二醇，PEU組腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，皮下注射600μg/kg17β雌二醇并腹腔注射10 mg/kg U0126。六組大鼠均每24 h注射一次，連續(xù)注射7 d。在整個(gè)麻醉過程當(dāng)中，將所有大鼠置于保溫箱中（26~2

3、8℃），嚴(yán)密觀察大鼠呼吸頻率及皮膚黏膜顏色變化，并持續(xù)低流量給氧（2 L/min）。待大鼠翻正反射恢復(fù)后，一同放回籠中（幼鼠與母鼠分離時(shí)間不超過5 h）。在末次注射結(jié)束后第15 min，每組隨機(jī)取3只大鼠，行動(dòng)脈血?dú)夥治鰴z測(cè)其PaO2水平。在末次給藥結(jié)束后24 h時(shí)，每組隨機(jī)取5只大鼠，采用免疫組化法檢測(cè)其海馬組織中活化的caspase3蛋白水平；另取每組5只大鼠，采用Western blot法檢測(cè)其海馬組織中pERK蛋白水平。

4、　　結(jié)果：
　　1.血?dú)夥治鼋Y(jié)果顯示：六組大鼠動(dòng)脈血中PaO2正常且組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　2.免疫組化結(jié)果顯示：DMSO組與E組海馬組織中活化的caspase3蛋白水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與F組比較，P組海馬組織中活化的caspase3蛋白表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）；與P組比較，PE組海馬組織中活化的caspase3蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）；與PE組比較，PEU組海馬組織中活化

5、的caspase3蛋白表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）。
　　3.Western blot結(jié)果顯示：DMSO組與E組海馬組織中pERK蛋白水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與F組比較，P組海馬組織中pERK蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）；與P組比較，PE組海馬組織中pERK蛋白表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）；與PE組比較，PEU組海馬組織中pERK蛋白表達(dá)下調(diào)（P＜0.05）。
　　結(jié)論：17β雌二醇可通過激活ERK信號(hào)通路改善丙

6、泊酚導(dǎo)致的發(fā)育期大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
　　第二部分：17β雌二醇對(duì)丙泊酚致發(fā)育期大鼠遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶功能障礙的影響
　　目的：評(píng)價(jià)17β雌二醇對(duì)丙泊酚致發(fā)育期大鼠遠(yuǎn)期學(xué)習(xí)記憶功能障礙的影響及其機(jī)制。
　　方法：7日齡雄性SD大鼠72只，體重11~18g，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為6組（n=12）：二甲基亞砜組（DMSO組），脂肪乳劑組（F組），17β雌二醇組（E組），丙泊酚組（P組），丙泊酚+17β雌二醇組（PE組），丙泊酚+

7、17β雌二醇+U0126組（PEU組）。E組皮下注射600μg/kg17β雌二醇，DMSO組皮下注射與之等容量的DMSO，P組腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，F(xiàn)組腹腔注射與之等容量脂肪乳劑，PE組腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，皮下注射600μg/kg17β雌二醇，PEU組腹腔注射75 mg/kg丙泊酚，皮下注射600μg/kg17β雌二醇并腹腔注射10 mg/kg U0126。六組大鼠均每24 h注射一次，連續(xù)注射7 d。在整個(gè)麻醉過

8、程當(dāng)中，所有大鼠置于保溫箱中（26~28℃），嚴(yán)密觀察大鼠呼吸頻率及皮膚黏膜顏色變化，并持續(xù)低流量給氧（2 L/min）。待大鼠翻正反射恢復(fù)后一同放回籠中（幼鼠與母鼠分離時(shí)間不超過5 h）。在末次注射結(jié)束后第15 min，每組隨機(jī)取3只大鼠，行動(dòng)脈血?dú)夥治鰴z測(cè)其PaO2水平。其余大鼠繼續(xù)飼養(yǎng)至60日齡，采用Morris水迷宮檢測(cè)各組大鼠學(xué)習(xí)記憶功能。Morris水迷宮測(cè)試結(jié)束后，每組隨機(jī)取5只大鼠，分別采用紫外比色法與ELISA法檢測(cè)其

9、海馬組織中谷氨酸（Glutamate， Glu）與γ氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）水平，并計(jì)算Glu/GABA比值。
　　結(jié)果：
　　1.血?dú)夥治鼋Y(jié)果顯示：六組大鼠動(dòng)脈血中PaO2水平正常且組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　2.Morris水迷宮結(jié)果顯示：定位航行實(shí)驗(yàn)中，DMSO組與E組大鼠同一天逃避潛伏期比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與F組比較， P組大鼠第3~5

10、天逃避潛伏期延長(zhǎng)（P＜0.05）；與P組比較，PE組大鼠第3~5天逃避潛伏期縮短（P＜0.05）；與PE組比較，PEU組大鼠第4~5天逃避潛伏期延長(zhǎng)（P＜0.05）?？臻g探索實(shí)驗(yàn)中，DMSO組與E組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)及靶象限停留時(shí)間百分比比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與F組比較，P組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)及靶象限停留時(shí)間百分比減少（P＜0.05）；與P組比較，PE組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)及靶象限停留時(shí)間百分比增加（P＜0.05）；與PE組比

11、較，PEU組大鼠穿越平臺(tái)次數(shù)及靶象限停留時(shí)間百分比減少（P＜0.05）。
　　3.紫外比色與ELISA結(jié)果顯示：六組大鼠海馬組織中GABA水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；DMSO組與E組Glu水平及Glu/GABA比值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與F組比較，P組Glu水平下降，Glu/GABA比值減?。≒＜0.05）；與P組比較，PE組Glu水平增加，Glu/GABA比值增大（P＜0.05）；PE組與PEU