紫檀芪對(duì)神經(jīng)細(xì)胞損傷模型的保護(hù)作用研究.pdf

1、大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究表明，雌激素在神經(jīng)生長(zhǎng)和再生、神經(jīng)保護(hù)、認(rèn)知和情緒調(diào)控中發(fā)揮著重要的生理作用。雖然雌激素具有多種保護(hù)作用，但是長(zhǎng)期服用雌激素會(huì)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜增生并可能誘發(fā)腫瘤。
　　植物雌激素類天然藥物作為雌激素的替代物，也具有類似雌激素的神經(jīng)保護(hù)作用，且作用相對(duì)溫和，毒副作用小。紫檀芪是新近被認(rèn)識(shí)的一種植物雌激素，主要提取自藍(lán)莓和葡萄籽。已有的研究發(fā)現(xiàn)，紫檀芪具有抗癌、抗氧化、抗炎等多種作用。
　　雖然已有研究初步證實(shí)紫檀

2、芪具有神經(jīng)保護(hù)作用，但其作用靶點(diǎn)及相關(guān)機(jī)制尚未明了。本課題擬利用過氧化氫(H2O2)處理人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SH-SY5Y細(xì)胞建立神經(jīng)細(xì)胞損傷模型，研究紫檀芪的神經(jīng)保護(hù)作用及作用機(jī)制，為研發(fā)新的雌激素替代藥物提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　[研究背景]
　　雌激素是人類生殖系統(tǒng)中一種重要的內(nèi)分泌激素，其主要生理作用包括促進(jìn)女性生殖器官發(fā)育和維持女性第二性征。大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究表明，雌激素在肝臟、心血管生理、神經(jīng)生長(zhǎng)和再生、神經(jīng)

3、保護(hù)、認(rèn)知和情緒調(diào)控中也發(fā)揮著重要的生理作用。雖然雌激素具有多種保護(hù)作用，但長(zhǎng)期服用雌激素會(huì)導(dǎo)致子宮內(nèi)膜增生并可能誘發(fā)腫瘤，因此研發(fā)效果明確、副作用小的雌激素替代物具有重要的臨床意義。植物雌激素是一類提取自植物，與雌激素結(jié)構(gòu)類似，作用相對(duì)溫和的小分子物質(zhì)，包括大豆黃酮、異黃酮、染料木素、白藜蘆醇等。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及流行病學(xué)研究顯示白藜蘆醇(resveratrol，Res)對(duì)心血管疾病、骨質(zhì)疏松癥、雌激素依賴的腫瘤、老年癡呆癥等多種絕經(jīng)后女性常

4、見病的臨床癥狀具有緩解作用。雖然已經(jīng)明確白藜蘆醇具有上述多種藥用價(jià)值，但由于其半衰期較短且其生物利用度較低，限制了它的臨床應(yīng)用前景。紫檀芪(pterostilbene，PTER)是新近被認(rèn)識(shí)的一種植物雌激素，主要提取自藍(lán)莓和葡萄籽，是白藜蘆醇的同源物。已有的研究發(fā)現(xiàn)，紫檀芪具有抗癌、抗氧化、抗炎等多種作用，與雌激素作用效果類似。紫檀芪半衰期比白藜蘆醇長(zhǎng)，生物利用度也更高，有研究將大劑量紫檀芪(3000mg/kg/d)用于動(dòng)物亦未見明顯毒

5、副作用。另有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)衰老大鼠服用紫檀芪后，學(xué)習(xí)和記憶能力有明顯改善，其作用效果優(yōu)于白藜蘆醇治療組。因此，與白藜蘆醇相比，紫檀芪可能是一種更為可靠的雌激素替代物。
　　雖然有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提示紫檀芪具有神經(jīng)保護(hù)作用，但其發(fā)揮保護(hù)作用的靶點(diǎn)及相關(guān)機(jī)制尚未見報(bào)道。
　　[研究目的]
　　采用H2O2處理SH-SY5Y細(xì)胞建立神經(jīng)細(xì)胞損傷模型，觀察不同劑量紫檀芪對(duì)損傷細(xì)胞的保護(hù)作用，并初步研究其分子機(jī)制。
　　[研究方法]

6、
　　采用H2O2處理SH-SY5Y細(xì)胞建立神經(jīng)細(xì)胞損傷模型，然后用不同濃度紫檀芪處理細(xì)胞，用MTT法和流式細(xì)胞術(shù)分別對(duì)細(xì)胞的存活率和凋亡情況進(jìn)行檢測(cè)，明確紫檀芪的神經(jīng)保護(hù)作用。采用Westernblotting檢測(cè)紫檀芪處理細(xì)胞后PI3K/Akt和MAPK/ERK通路的激活情況，研究與紫檀芪神經(jīng)保護(hù)作用相關(guān)的信號(hào)通路。采用ERα和ERβ的特異性抑制劑處理細(xì)胞，觀察紫檀芪保護(hù)作用及相關(guān)信號(hào)通路的變化情況，明確介導(dǎo)紫檀芪神經(jīng)保護(hù)作用

7、的雌激素受體類型。
　　[研究結(jié)果]
　　(1)MTT檢測(cè)結(jié)果表明紫檀芪能顯著提高H2O2損傷引起的細(xì)胞存活力下降;
　　(2)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明紫檀芪能顯著減少H2O2損傷引起的細(xì)胞凋亡;Westernblotting結(jié)果表明H2O2損傷可以降低抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)，而紫檀芪共處理則顯著上調(diào)Bcl-2表達(dá)水平;
　　(3)Westernblotting結(jié)果表明紫檀芪能快速激活MAPK/ERK和PI3K/Ak

8、t信號(hào)通路;
　　(4)細(xì)胞活力檢測(cè)結(jié)果表明，加入ERα特異性抑制劑MPP之后，紫檀芪的保護(hù)作用基本消失，而加入ERβ的特異性抑制劑PHTPP之后，紫檀芪仍能顯著提高H2O2造成的細(xì)胞存活力下降;Westernblotting結(jié)果表明加入MPP之后，紫檀芪對(duì)MAPK/ERK和PI3K/Akt信號(hào)通路的激活作用顯著減弱，而PHTPP基本不影響紫檀芪對(duì)上述兩個(gè)通路的激活作用。
　　[結(jié)論]
　　紫檀芪對(duì)H2O2造成的神經(jīng)細(xì)