黃芪化學成分及其對神經(jīng)細胞保護活性的研究.pdf

1、蒙古黃芪(Astragalusmembranaceus(Fish.)Bge.var.mongholicus)為豆科(Leguminosae)黃芪屬植物，是中國傳統(tǒng)重要的補益藥之一。具有益氣升陽、固表止汗、利水消腫、托毒生肌的功效。 本研究主要利用色譜的方法，結合細胞生物學活性分析，對其化學成分進行跟蹤分離，采用光譜技術(紅外，紫外、核磁共振波譜和質(zhì)譜技術)對得到的10個單體化合物進行結構解析和鑒定，分別鑒定為芒柄花素、芒柄花苷、

2、毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷、9，10-二甲氧基紫檀烷3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、腺苷、肌醇甲苷、胡蘿卜苷、β-谷甾醇和蔗糖，其中腺苷和肌醇甲苷為首次從該植物中分離得到。 選用神經(jīng)細胞的模式細胞株PC12(ratpheochromocytomacellline)細胞作為實驗對象，利用黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶(xanthine/xanthineoxidase，XA/XO)對細胞進行損傷，造成直接的氧化損傷模型。利用MTT(3-(4，5-

3、dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenylterazoliumbromide)法分別檢測了五種黃芪異黃酮對損傷的PC12細胞的保護效應；采用LDH(lactatedehydrogenase)法和熒光染色法，檢測了五種異黃酮對細胞膜的影響；同時檢測了芒柄花素、毛蕊異黃酮及其苷對細胞內(nèi)抗氧化體物GSH(glutathione)和抗氧化酶SOD(superoxidedismutase)、GSH-Px(glutathi

4、oneperoxidase)等的影響。結果表明0.1μg/ml毛蕊異黃酮和0.05μg/ml芒柄花素對損傷細胞具有明顯的保護活性，能通過提高細胞內(nèi)源性抗氧化物含量，降低膜的流動性，穩(wěn)定膜結構，來提高細胞的抗氧化能力，減輕細胞的脂質(zhì)過氧化程度，保護細胞免受損傷。 利用DPPH(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl)法和黃嘌呤/黃嘌呤氧化酶體系檢測了五種黃芪異黃酮在體外的直接抗氧化活性。毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮苷

5、和芒柄花素對DPPH有機自由基的清除活性依次減弱，活性的大小與結構中羥基的位置和數(shù)目密切相關，由于半數(shù)有效劑量均高于100μg/ml，所以不是高效的有機自由基清除劑；在XA/XO體系中，五種異黃酮不具有清除超氧自由基的能力。同時，毛蕊異黃酮及其苷對黃嘌呤氧化酶具有較弱的抑制作用，它們的IC50大于40μM，也不是強的酶活抑制劑。鑒于黃芪異黃酮直接的抗氧化能力較弱，而且，在無細胞體系中的有效濃度遠遠高于在細胞體系中的有效濃度，因此，黃芪異

6、黃酮對氧化損傷的PC12細胞的保護作用不是源于它們直接的抗氧化活性。 利用高濃度的谷氨酸對細胞進行損傷，造成間接的氧化損傷模型，結果表明黃芪異黃酮對這種細胞損傷具有更強的保護作用。0.1μg/ml的芒柄花素和毛蕊異黃酮可以明顯保護細胞免受損傷。它們通過提高細胞內(nèi)源性抗氧化物含量，穩(wěn)定細胞膜結構，提高損傷細胞Bcl-2蛋白的表達，降低細胞的脂質(zhì)過氧化程度，保護細胞免受損傷。 總之，本研究明確了黃芪中對氧化損傷的PC12細胞