mfat-1基因對氯化鈷誘導的成體神經干細胞缺氧性損傷保護作用的研究.pdf

1、研究背景:隨著人們生活方式和飲食習慣的改變，缺血性腦卒中已經成為成年人致死致殘以及神經功能損傷的主要原因之一。據(jù)統(tǒng)計缺血性腦卒中占腦卒中的比例已超過80％，然而現(xiàn)在臨床仍然缺乏有效的治療手段。成體神經干細胞替代性治療方法在神經系統(tǒng)結構和功能恢復治療方面將有廣闊的應用前景。但是，成體神經干細胞替代療法應用于缺血性腦卒中臨床治療的最大障礙是在缺血半暗帶區(qū)缺血缺氧的微環(huán)境對成體神經干細胞活性和功能的損傷。所以，能否找到一種保護缺血半暗帶區(qū)成體

2、神經干細胞免受缺血缺氧性損傷的方法是成體神經干細胞替代療法臨床應用的關鍵。
　　目的:通過建立成體神經干細胞體外缺血缺氧性損傷模型，探討mfat-1基因是否對氯化鈷誘導的成體神經干細胞缺氧性損傷具有保護作用，同時進一步研究其內在機制，為成體神經干細胞替代療法的臨床應用打下基礎。
　　方法:mfat-1轉基因小鼠和其同窩陰性小鼠飼養(yǎng)至8-12周齡，基因型鑒定完成后，無菌環(huán)境下提取兩組小鼠大腦Subventricularzone

3、(SVZ)區(qū)神經干細胞，培養(yǎng)至第三代用于以下實驗。細胞免疫組化鑒定神經干細胞標志蛋白Nestin，通過氣相色譜技術分別測定mfat-1組及同窩陰性組鼠腦和神經干細胞n-3/n-6的比值。通過氯化鈷誘導體外構建成體神經干細胞缺血缺氧模型;通過測定兩組細胞的細胞活性，細胞凋亡率和細胞增殖率來研究mfat-1基因對成體神經干細胞體外缺氧性損傷的保護作用。為了進一步探究mfat-1基因的作用機制，我們分別測定了兩組細胞活性氧水平以及谷胱甘肽表達

4、水平，確定了mfat-1基因的保護機制是通過促進抗氧化應激損傷來完成的。我們選取了抗氧化應激的關鍵信號通路Nrf2/ARE信號通路，分別檢測了Nrf2及下游基因HO-1、NQO-1、GCLC mRNA表達水平以及蛋白表達水平。
　　結果:mfat-1基因可以增強氯化鈷誘導的缺氧性損傷中成體神經干細胞的細胞活性，與此同時抑制氯化鈷介導的成體神經干細胞的凋亡。通過BrdU標記實驗表明，在氯化鈷誘導的體外缺氧損傷模型中，mfat-1組的

5、細胞增殖率明顯高于同窩陰性對照組?；钚匝跛揭约凹毎入赘孰谋磉_水平檢測結果顯示mfat-1組細胞活性氧水平明顯低于同窩陰性對照組，同時谷胱甘肽表達量明顯高于同窩陰性對照組。實時定量PCR檢測結果顯示Nrf2及其下游基因的mRNA的表達量均高于同窩陰性對照組。Western blot檢測結果顯示Nrf2及其下游基因HO-1、NQO-1、GCLC的蛋白表達量均高于對照組。
　　結論:fat-1基因對氯化鈷介導的成體神經干細胞缺氧性損