硒甲基半胱氨酸對(duì)Aβ1-42導(dǎo)致的神經(jīng)干細(xì)胞凋亡的保護(hù)及其機(jī)制研究.pdf

1、β-淀粉樣蛋白(β-amyloid,Aβ)是老年斑(senile plaques,SPs)的主要成分,目前普遍認(rèn)為Aβ的聚集是阿爾茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)發(fā)病的主要原因,大量聚集的Aβ具有神經(jīng)毒性。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),作為人體必需微量元素之一的硒具有神經(jīng)毒性保護(hù)作用。鑒于此,本研究通過(guò)一系列體外實(shí)驗(yàn)探討了硒甲基半胱氨酸對(duì)Aβ1-42導(dǎo)致的神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells,NSCs)凋亡作用的保護(hù)

2、及其保護(hù)機(jī)理,有助于進(jìn)一步了解Aβ對(duì)神經(jīng)發(fā)生的作用,為NSCs用于治療AD等神經(jīng)退行性疾病提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
　　 取新生1 d的ICR(institute of cancer researcch,ICR)小鼠大腦,通過(guò)機(jī)械分離和體外培養(yǎng)獲取NSCs。利用免疫組織化學(xué)和RT-PCR方法驗(yàn)對(duì)NSCs進(jìn)行鑒定。
　　 在體外將1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL的硒甲基半胱氨酸分別作用于NSCs2

3、4 h后,再將聚合后的10μmol/L的Aβ1-42寡聚體加入相應(yīng)實(shí)驗(yàn)組中作用12 h、24 h和48 h,運(yùn)用MTT法和流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)細(xì)胞增殖和凋亡情況。通過(guò)RT-PCR和Western Blot檢測(cè)硒甲基半胱氨酸和Aβ1-42寡聚體作用前后NSCs中c-Jun和JNK基因的表達(dá),探尋硒甲基半胱氨酸對(duì)Aβ1-42導(dǎo)致的NSCs凋亡的保護(hù)機(jī)制。
　　 結(jié)果顯示,1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL硒甲基半胱氨酸分別單獨(dú)

4、作用于NSCs12 h、24 h和48 h,對(duì)NSCs增殖無(wú)顯著影響;而50μg/mL的硒甲基半胱氨酸作用于NSCs12 h、24 h和48 h,NSCs增殖下降,說(shuō)明大劑量的硒甲基半胱氨酸對(duì)NSCs有損傷作用。在10μmol/L的Aβ1-42和1μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、50μg/mL的硒甲基半胱氨酸共作用組中,12 h時(shí),1μg/mL、5μg/mL和50μg/mL硒甲基半胱氨酸對(duì)10μmol/L的Aβ1-42導(dǎo)致的凋

5、亡無(wú)明顯保護(hù)作用,而10μg/mL硒甲基半胱氨酸對(duì)10μmol/L的Aβ1-42導(dǎo)致的凋亡具有極顯著保護(hù)作用(p＜0.01);24 h時(shí),1μg/mL、5μg/mL和10 gg/mL硒甲基半胱氨酸對(duì)10μmol/L的Aβ1-42導(dǎo)致的凋亡均具有極顯著保護(hù)作用(p＜0.01),而50μg/mL硒甲基半胱氨酸對(duì)10μmol/L的Aβ1-42導(dǎo)致的凋亡無(wú)明顯保護(hù)作用;48 h時(shí),1μg/mL、5μg/mL和10μg/mL硒甲基半胱氨酸對(duì)10μ

6、mol/L的Aβ1-42導(dǎo)致的凋亡均具有顯著保護(hù)作用,且5μg/mL和10μg/mL硒甲基半胱氨酸保護(hù)作用極顯著(p＜0.01),而50μg/mL硒甲基半胱氨酸對(duì)10μmol/L的Aβ1-42導(dǎo)致的凋亡無(wú)明顯保護(hù)作用。隨后,我們對(duì)具有保護(hù)作用的三組濃度進(jìn)行時(shí)間上的比較,發(fā)現(xiàn)僅有10μg/mL硒甲基半胱氨酸對(duì)10μmol/LAβ1-42導(dǎo)致的凋亡的保護(hù)作用,在48 h時(shí)與24 h、12 h時(shí)具有極其顯著差異(p＜0.01),而其它濃度的硒

7、甲基半胱氨酸對(duì)10μmol/LAβ1-42導(dǎo)致的凋亡的保護(hù)作用不具有作用時(shí)間上的差異。硒甲基半胱氨酸對(duì)Aβ1-42導(dǎo)致的NSCs凋亡作用的保護(hù)機(jī)制中,RT-PCR結(jié)果顯示,保護(hù)組中,10μmol/LAβ1-42+1μg/mL Se、10μmol/LAβ1-42+5μg/mL Se、10μmol/L Aβ1-42+10μg/mL Se與10μmol/LAβ1-42單獨(dú)作用組比較,c-Jun和JNK表達(dá)逐漸減弱,而10μmol/L Aβ1-