二甲雙胍聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)肝癌細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　目前對(duì)于肝癌的治療手段較多，然而整體看來(lái)，效果并不理想，肝癌患者的生存率較低的現(xiàn)狀并沒(méi)有在根本上的得到很大的改觀(guān)，因此，在手術(shù)治療的同時(shí)如何探尋更為有效的藥物具有重要意義，本實(shí)驗(yàn)將二甲雙胍、奧沙利鉑、以及二者聯(lián)合的情況下分別作用于肝癌BEL-7402細(xì)胞，并設(shè)定相應(yīng)的觀(guān)察對(duì)照組，通過(guò)運(yùn)用不同的方法和指標(biāo)來(lái)觀(guān)察藥物對(duì)細(xì)胞的作用，以評(píng)價(jià)藥物對(duì)肝癌細(xì)胞的影響作用，以及二者之間是否具有協(xié)同作用，從而為臨床用藥提供基礎(chǔ)研究。

2、r>　　方法：
　　在體外培養(yǎng)BEL-7402細(xì)胞，并將細(xì)胞分為4組，分別為空白對(duì)照組，二甲雙胍組、奧沙利鉑組、二甲雙胍聯(lián)合奧沙利鉑組。本次試驗(yàn)對(duì)象均為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。首先，觀(guān)察經(jīng)過(guò)藥物作用后，細(xì)胞增殖情況如何(MTT法測(cè)定);其次，在電鏡下觀(guān)察上述藥物作用細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)上發(fā)生何種變化以及超微結(jié)構(gòu)的改變情況;第三，觀(guān)察藥物作用以后細(xì)胞凋亡的變化（流式細(xì)胞技術(shù)）;最后，觀(guān)察藥物在作用于肝癌BEL-7402細(xì)胞后caspase-3

3、、caspase-9以及促凋亡蛋白Bax表達(dá)和抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)情況(Western Blot技術(shù))。
　　結(jié)果：
　　1.BEL-7402細(xì)胞在二甲雙胍、奧沙利鉑單用以及聯(lián)合應(yīng)用的情況下其生長(zhǎng)及增殖均受到了抑制。在單用其中任何一種藥物的情況下，抑制效果的強(qiáng)弱隨著時(shí)間的增加也更加明顯，其差異有顯著性(P＜0.05）;并且二者聯(lián)合用藥，與單獨(dú)用藥相比，其生長(zhǎng)速度以及增殖抑制率明顯增加，并且抑制率有顯著性差異(P＜0.0

4、5）。
　　2.電鏡觀(guān)察發(fā)現(xiàn)二甲雙胍及奧沙利鉑作用于BEL-7402細(xì)胞后，細(xì)胞貼壁能力下降，細(xì)胞體積縮小，變圓，胞漿濃縮，核固縮，細(xì)胞漂浮于培養(yǎng)液中，呈現(xiàn)凋亡早期的形態(tài)學(xué)改變。
　　3.流式細(xì)胞結(jié)果顯示:經(jīng)藥物處理48h后，流式細(xì)胞結(jié)果顯示，二甲雙胍組與奧沙利鉑組凋亡率分別17.63±1.12％和20.13±0.86;較空白對(duì)照組(13.15±0.65)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，聯(lián)合用藥組的細(xì)胞凋亡率為27.42±

5、1.05％;與單獨(dú)用藥相比，差距有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　4.Western Blot技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，在藥物二甲雙胍和奧沙利鉑的作用下，caspase-3、caspase-9的表達(dá)明顯升高，在二者聯(lián)合用藥的情況下，效果更明顯。在藥物作用下促凋亡蛋白Bax表達(dá)明顯升高，而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)在單藥及聯(lián)合用藥情況下均無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論：
　　1.二甲雙胍和奧沙利鉑單用或者聯(lián)合應(yīng)用均可以對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-