二甲雙胍對(duì)膽管癌細(xì)胞株RBE的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　 檢測不同濃度二甲雙胍及二甲雙胍聯(lián)合AMPK抑制劑Compound C對(duì)人肝膽管癌RBE細(xì)胞的增殖、凋亡和周期分布的影響，研究AMPK及mTOR在膽管癌RBE細(xì)胞中的活性變化，初步探討其可能的分子生物學(xué)機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.MTT檢測不同濃度二甲雙胍對(duì)人肝膽管癌RBE細(xì)胞增殖的影響:體外培養(yǎng)膽管癌RBE細(xì)胞，MTT法檢測濃度為0、5、10、20、30 mmol/L的二甲雙胍及各組（對(duì)照組、2

2、0 mmol/L二甲雙胍、20umol/L Compound C組、20 umol/L Compound C+20 mmol/L二甲雙胍組）作用于RBE細(xì)胞后24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的存活率;
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度二甲雙胍干預(yù)后細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡率:流式細(xì)胞術(shù)檢測濃度為0、5、10、20、30 mmol/L的二甲雙胍及各組（對(duì)照組、20 mmol/L二甲雙胍、20 umol/L Compound C組、20

3、umol/L Compound C+20 mmol/L二甲雙胍組）作用于膽管癌RBE細(xì)胞48小時(shí)后各組細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡率;
　　 3.檢測不同濃度二甲雙胍干預(yù)后AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR的變化:Western Blot檢測各組濃度為0、5、10、20、30 mmol/L的二甲雙胍及各組（對(duì)照組、20 mmol/L二甲雙胍、20u mol/LCompound C組、20 umol/L Compound C

4、+20mmol/L二甲雙胍組）作用于膽管癌RBE細(xì)胞48小時(shí)后各組細(xì)胞中AMPK、磷酸化的AMPK(Thr172)和mTOR、磷酸化的mTOR(Ser2448)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.MTT法結(jié)果顯示:隨著二甲雙胍濃度的增加，各組細(xì)胞存活率明顯降低，10、20、30 mmol/L二甲雙胍48h組存活率明顯低于24小時(shí)組，二甲雙胍聯(lián)合Compound C作用時(shí)，與對(duì)照組間無顯著差異;
　　 2.流式細(xì)胞術(shù)

5、結(jié)果顯示:隨著二甲雙胍濃度的增加，各組細(xì)胞G0/G1細(xì)胞逐漸增加，S期細(xì)胞逐漸減少，早期凋亡率逐漸增加，甲雙胍聯(lián)合Compound C作用時(shí)，與對(duì)照組間無顯著差異;
　　 3.Western Blot結(jié)果顯示:隨著二甲雙胍濃度的增加，各組間AMPK、mTOR的表達(dá)量無顯著性差異，而隨著二甲雙胍濃度的增加， p-AMPK的表達(dá)量隨之增加，p-mTOR的表達(dá)量則隨之減少。在二甲雙胍聯(lián)合Compound C組，p-AMPK及p-mTO