淺藍菌素對人膽管癌細胞株RBE生長的影響及機制的實驗研究.pdf

1、 碩士學位論文 論文題目 淺藍菌素對人膽管癌細胞株 RBE 生長的影響 及機制的實驗研究 研 究 生 姓 名 萬 云 指導教師姓名 許春芳 專 業(yè) 名 稱 消化病學 研 究 方 向 胰腺疾病的基礎及臨床研究 論文提交日期 2013 年 5 月 淺藍菌素對人膽管癌細胞株 RBE 生長的影響及機制的實驗研究 中文摘要 I 淺藍菌素對人膽管癌細胞株 RBE 生長的影響及機制的實驗研究 中文摘要 目的 目的：探討脂肪酸合酶（fat

2、ty acid synthane，F(xiàn)AS）抑制劑淺藍菌素（Cerulenin，Cer）對人膽管癌細胞株RBE 的生長抑制作用，并初步探討可能的作用機制。 方法： 體外培養(yǎng)膽管癌細胞 RBE， 應用不同濃度(0、 2.5、 5、 10、 20、 40ug／m1)Cer處理對數(shù)生長期細胞， 在干預后的不同時間段收集細胞。 采用細胞增殖與毒性檢測法(MTT)檢測 OD 值，計算對照組與各實驗組 RBE 細胞的抑制率及最適宜的 CerIC50；

3、取 Cer 濃度為 0、5、10、20ug／m1 處理膽管癌 RBE 細胞,流式細胞術(shù)檢測細胞周期及細胞凋亡的情況；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測 FASmRNA、Bcl-2mRNA、BaxmRNA 表達水平的變化；免疫印跡法(WesternBlot)檢測細胞凋亡因子 Bcl-2、Bax蛋白的表達情況。 結(jié)果 結(jié)果： （1）MTT 法顯示不同濃度的 Cer 可明顯抑制膽管癌細胞株 RBE 的增殖,細胞生長抑制率呈時間-濃度依賴性

4、(P<0.05)。 （2）流式細胞儀檢測結(jié)果表明，RBE細胞經(jīng) Cer 干預 48 小時后， 隨著藥物濃度增加， 細胞周期 S 期比例由 （6.97± 0.37） %上升到（26.43± 1.38）%，G2 期細胞比例下降（P<0.05） 。RBE 細胞經(jīng) 5、10、20ug／m1Cer 作用 48h 后的凋亡率分別為 （10.73± 0.82） %、 （25.8± 1.59） %、

5、（45.1± 1.73） %，與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 （3）RT-PCR 檢測 FASmRNA、Bcl-2mRNA、 BaxmRNA 顯示 RBE 細胞經(jīng) Cer 作用 48 小時后， FASmRNA、 Bcl-2mRNA 的表達呈濃度依賴性下降，BaxmRNA 呈濃度依賴性升高，各實驗組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05） 。 （4）Western Blot 結(jié)果顯示 RBE