二甲雙胍在IL-6誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞EMT中的作用.pdf

1、背景：
　　胃癌是目前人類最常見的消化道惡性腫瘤之一，其死亡率占相關(guān)腫瘤死亡率的第二位。現(xiàn)階段胃癌的發(fā)病原因和機(jī)制尚未完全清楚，由于早期無(wú)較為明顯地癥狀，因此很多病人在前來(lái)確診時(shí)就已經(jīng)有局部或遠(yuǎn)處的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響腫瘤患者的治療及預(yù)后。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transition，EMT)是一系列生物學(xué)過(guò)程，是上皮細(xì)胞為適應(yīng)環(huán)境而引發(fā)的，其特征性表現(xiàn)為上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，在多種惡性腫瘤的

2、侵襲和轉(zhuǎn)移方面都起著至關(guān)重要的作用，尤其是上皮細(xì)胞來(lái)源的消化道腫瘤方面。因此，對(duì)EMT過(guò)程進(jìn)行深入探究,不僅為消化系腫瘤的預(yù)防和治療提供方向，也將為消化系腫瘤患者的預(yù)后和抗腫瘤藥物的應(yīng)用提供依據(jù)。
　　二甲雙胍是一種臨床上廣泛使用的雙胍類降糖藥物，作為胰島素增敏劑主要針對(duì)2型糖尿病的治療。大量研究表明，二甲雙胍通過(guò)細(xì)胞能量代謝，細(xì)胞周期蛋白以及microRNA的調(diào)節(jié)能抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。最新的研究進(jìn)展提示，二甲雙胍能抑制多種惡性腫

3、瘤的EMT進(jìn)程，從而影響腫瘤進(jìn)展及預(yù)后。本研究通過(guò)檢測(cè)二甲雙胍對(duì)IL-6誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞EMT模型的生長(zhǎng)，侵襲遷移能力的改變，相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)初步探討二甲雙胍對(duì)胃癌細(xì)胞EMT的影響。
　　目的：
　　探討雙胍類降糖藥二甲雙胍對(duì)IL-6誘導(dǎo)的胃癌細(xì)胞SGC7901上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用。
　　方法：
　　采用IL-6體外刺激的方法培養(yǎng)SGC7901，構(gòu)建EMT模型,于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶

4、GC7901細(xì)胞進(jìn)行分組，可分為SGC7901-ctr組，SGC7901+M組，SGC7901-IL-6組和SGC7901-IL-6+M組；MTT法檢測(cè)二甲雙胍對(duì)細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)二甲雙胍對(duì)SGC7901細(xì)胞周期的影響；細(xì)胞劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)二甲雙胍對(duì)細(xì)胞增殖及遷移的影響，RT-PCR及westernblot檢測(cè)EMT相關(guān)的重要標(biāo)志分子E-cadherin，N-cadherin，Vimentin和Twist1在mRNA和蛋白表

5、達(dá)水平上的變化情況。
　　結(jié)果：
　　1.倒置顯微鏡下觀察各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞形態(tài)學(xué)差異，IL-6能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞SGC-7901發(fā)生一系列形態(tài)學(xué)的改變，由典型的上皮細(xì)胞樣細(xì)胞形態(tài)向間質(zhì)細(xì)胞樣形態(tài)轉(zhuǎn)化，多數(shù)細(xì)胞排列較為松散，形態(tài)表現(xiàn)為類似成纖維狀，部分細(xì)胞呈梭形，紡錘體形，較之普通SGC7901細(xì)胞有典型的形態(tài)學(xué)變化。
　　2.MTT法檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞增殖能力的變化，二甲雙胍能顯著抑制胃癌細(xì)胞SGC7901的增殖促進(jìn)細(xì)胞凋亡，S

6、GC7901-IL-6組較SGC7901-ctr組有明顯地生長(zhǎng)增殖優(yōu)勢(shì)（P<0.01），而SGC7901-IL-6+M組較之SGC7901-IL-6組又有生長(zhǎng)抑制（P<0.01）。
　　3.劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)比較各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞遷移能力，在劃痕后24h，SGC7901-IL-6組較之SGC7901-ctr組細(xì)胞缺口較小；在劃痕后48h，SGC7901-IL-6組細(xì)胞劃痕的缺口已逐漸縮小至接近愈合的狀態(tài)，而對(duì)照組劃痕缺口仍比較寬。二甲雙胍處理

7、過(guò)的SGC7901-IL-6與未處理組相比細(xì)胞缺口增大。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞細(xì)胞周期的變化，二甲雙胍能顯著影響胃癌細(xì)胞的周期分布且能明顯抑制胃癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力。
　　4. PCR用于檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞EMT相關(guān)標(biāo)志分子mRNA的表達(dá)水平，PCR結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，IL-6處理過(guò)的SGC7901細(xì)胞E-Cadherin mRNA表達(dá)明顯降低，而N-Cadherin、Vimentin和Twist1 mRNA表達(dá)明顯增高(

8、P<0.01)。與未受二甲雙胍處理過(guò)的IL-6誘導(dǎo)的7901細(xì)胞相比，加用二甲雙胍干預(yù)的7901(IL-6)細(xì)胞E-Cadherin mRNA表達(dá)增高，而N-Cadherin、Vimentin和Twist1 mRNA表達(dá)降低(P<0.01)。
　　5.Western blot用于檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與EMT相關(guān)標(biāo)志分子的蛋白表達(dá)水平，結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，IL-6處理過(guò)的SGC7901細(xì)胞E-Cadherin蛋白表達(dá)量明顯降低，而N

9、-Cadherin、Vimentin和Twist1蛋白表達(dá)量明顯增高(P<0.05)。二甲雙胍作用后E-cadherin蛋白表達(dá)量增加，而N-cadherin,Vimentin和Twist1蛋白表達(dá)量均降低(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.IL-6能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞SGC-7901發(fā)生EMT，使細(xì)胞的增殖和遷移能力增強(qiáng)，EMT相關(guān)標(biāo)志分子的表達(dá)水平發(fā)生相應(yīng)變化。
　　2.雙胍類降糖藥二甲雙胍能明顯抑制胃癌細(xì)胞 SGC