二甲雙胍抑制IL-6激活JAK-STAT3信號(hào)通路誘導(dǎo)的Hela細(xì)胞上皮-間質(zhì).pdf

1、目的：研究二甲雙胍聯(lián)合重組人白細(xì)胞介素-6（Human recombinant IL-6）經(jīng) JAK/SATA3信號(hào)通路對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的抑制作用，并分析其機(jī)制。
　　方法：
　　1.體外37℃、5％CO2飽和濕度條件下培養(yǎng)宮頸癌Hela細(xì)胞；
　　2.不同濃度的IL-6、二甲雙胍在不同時(shí)間點(diǎn)處理Hela細(xì)胞，通過(guò)CCK-8法篩選出IL-6、二甲雙胍的最佳作用濃度及時(shí)間；
　　3.將實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照

2、組、IL-6組、二甲雙胍組及IL-6+二甲雙胍組，用篩選出的IL-6、二甲雙胍的作用濃度及及時(shí)間處理Hela細(xì)胞；
　　4.倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化；
　　5.AO/EB熒光雙染色法觀察各組細(xì)胞凋亡、壞死情況；
　　6.Western Blot檢測(cè)各組細(xì)胞p-STAT3蛋白、Twist蛋白及E-cadherin蛋白變化；
　　7.RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞Twist mRNA、E-cadherin mRNA

3、變化。
　　結(jié)果：
　　1.CCK-8結(jié)果表明IL-6及二甲雙胍的最佳作用濃度分別為50ng/ml、10mmol/L，最佳作用時(shí)間為48h；
　　2.觀察發(fā)現(xiàn)對(duì)照組細(xì)胞表現(xiàn)出典型的上皮細(xì)胞特性，呈橢圓形，緊密排列；IL-6組細(xì)胞呈間質(zhì)細(xì)胞表型改變，間隙明顯增寬，細(xì)胞呈紡錘狀和長(zhǎng)梭形，排列散亂；二甲雙胍組細(xì)胞形態(tài)圓形，細(xì)胞成團(tuán)堆積，較多壞死細(xì)胞漂?。籌L-6+二甲雙胍組細(xì)胞形態(tài)圓形、長(zhǎng)梭形，細(xì)胞核疏松，壞死細(xì)胞明顯增多，

4、成團(tuán)漂??；
　　3.AO/EB熒光雙染色發(fā)現(xiàn)對(duì)照組、IL-6組只有少量細(xì)胞凋亡，二甲雙胍組有較多細(xì)胞凋亡，而IL-6+二甲雙胍組幾乎全為凋亡細(xì)胞，細(xì)胞成片漂浮。統(tǒng)計(jì)各組細(xì)胞凋亡、壞死率發(fā)現(xiàn)，IL-6+二甲雙胍組細(xì)胞凋亡、死亡率明顯多于其他各組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；
　　4.Western Blot結(jié)果表明IL-6組較對(duì)照組p-STAT3蛋白（1.54±0.41 VS1.00±0.00）、Twist蛋白（1.61

5、±0.08VS1.00±0.00）表達(dá)量明顯增加、E-cadherin蛋白（0.63±0.02VS1.00±0.00）表達(dá)量下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；二甲雙胍組較對(duì)照組p-STAT3蛋白（0.94±0.03VS1.0±0.00）、Twist蛋白（0.97±0.03 VS1.00±0.00）及E-cadherin蛋白（1.03±0.0242 VS1.00±0.00）表達(dá)無(wú)明顯升高或降低，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；IL

6、-6+二甲雙胍組較對(duì)照組p-STAT3蛋白（0.56±0.06VS1.00±0.00）、Twist蛋白（0.34±0.12VS1.00±0.00）、E-cadherin蛋白（0.44±0.01VS1.00±0.00）表達(dá)量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　5.RT-PCR結(jié)果表明，IL-6組Twist mRNA表達(dá)增加，E-cadherin mRNA表達(dá)下降，較對(duì)照組有顯著性差異（1.63±0.04 VS1.00±

7、0.00，0.56±0.06VS1.00±0.00；p＜0.05）；IL-6+二甲雙胍組TwistmRNA、E-cadherin mRNA表達(dá)下降，較對(duì)照組有顯著性差異（0.45±0.02VS1.00±0.00，0.26±0.10VS1.00±0.00；p＜0.05）；二甲雙胍組Twist mRNA、E-cadherin mRNA表達(dá)較對(duì)照組差異無(wú)顯著性（0.94±0.06VS1.00±0.00，1.05±0.34VS1.00±0.00