基于真皮成纖維誘導條件下胃癌細胞BGC-823的轉(zhuǎn)化現(xiàn)象及其機制.pdf

1、1.研究背景:
　　腫瘤轉(zhuǎn)移是威脅人類健康的第一大問題，90％以上的腫瘤病人死于腫瘤遠處轉(zhuǎn)移。多數(shù)患者在初診時并未出現(xiàn)明顯的腫瘤轉(zhuǎn)移，隨著腫瘤的進展而出現(xiàn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，但目前對腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)機制仍在探索中。
　　目前已經(jīng)明確，腫瘤細胞通過外滲作用進入周圍組織是腫瘤轉(zhuǎn)移的首要條件。進入組織中的腫瘤細胞首先與細胞外基質(zhì)直接接觸，它會受到正常組織內(nèi)的細胞及細胞外基質(zhì)的影響而發(fā)生轉(zhuǎn)變，同時，細胞-細胞、細胞-細胞外基質(zhì)的相互作用共同調(diào)

2、節(jié)腫瘤細胞生物學行為，包括細胞增殖、表型、分泌等，因此，我們認為正常的成纖維細胞在腫瘤發(fā)生及進展過程起關(guān)鍵作用。
　　成纖維細胞是細胞外基質(zhì)中主要細胞。成纖維細胞不僅可以提供從細胞外微環(huán)境的刺激，還可通過旁分泌途徑分泌大量的細胞因子。研究指出腫瘤相關(guān)的成纖維細胞與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，然而正常的成纖維細胞對腫瘤細胞的作用一直存在爭議。正常成纖維細胞抑制永生化的前列腺上皮細胞惡性轉(zhuǎn)化。而在乳腺癌中，成纖維細胞促進了導管內(nèi)癌轉(zhuǎn)變?yōu)榻?/p>

3、癌。而實驗方法的不同可能是導致差異結(jié)果的一個原因。
　　在實驗中，我們通過將胃癌細胞BGC-823s與正常的成纖維細胞進行體外共同培養(yǎng)以模擬體內(nèi)腫瘤細胞與正常成纖維細胞的相互作用，我們發(fā)現(xiàn)，正常成纖維細胞可將胃癌BGC-823s誘導轉(zhuǎn)化為散在的短梭形細胞，該細胞生物學行為與BGC-823截然不同，包括增殖、侵襲、遷移、轉(zhuǎn)移和化療敏感性。動物實驗中，我們證實該細胞成瘤能力明顯減低，但轉(zhuǎn)移能力卻增強，尤其是淋巴轉(zhuǎn)移能力，我們初步研究發(fā)

4、現(xiàn)該群細胞E-鈣粘素顯著下調(diào)，證實該細胞具有上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)的特性。
　　2.實驗方法:
　　2.1正常成纖維細胞與胃癌細胞BGC-823長期共觀察腫瘤細胞大體變化;
　　2.2通過不同熒光素標記成纖維細胞及BGC-823，并進行體外及體內(nèi)示蹤;
　　2.3通過細胞增殖和細胞周期實驗檢測BGC-823細胞增殖能力，通過遷移和劃痕實驗檢測細胞遷移能力，通過侵襲實驗和三維培養(yǎng)檢測細胞侵襲能力，并通過藥物抑制實驗及細胞

5、凋亡檢測腫瘤細胞對順鉑和5-FU藥物化療敏感性;
　　2.4通過實時熒光定量PCR，蛋白凝膠電泳及細胞免疫熒光方法觀察轉(zhuǎn)化后的BGC-823細胞內(nèi)E-鈣粘素表、波型蛋白、β-連環(huán)蛋白和N-鈣粘素表達情況，并與未轉(zhuǎn)化的BGC-823細胞對照;
　　2.5將腫瘤細胞通過鼠尾靜脈注射建立靜脈注射模型觀察兩組腫瘤細胞在體內(nèi)分布的差異;
　　2.6通過皮下注射腫瘤細胞建立皮下種植模型觀察腫瘤細胞成瘤能力和轉(zhuǎn)移能力;
　　2

6、.7通過熒光示蹤方法觀察早期腫瘤細胞在體內(nèi)的情況;
　　2.8通過免疫組化的方法觀察各個時間點淋巴結(jié)中E-鈣粘素表和β-鏈蛋白表達情況。
　　3.實驗結(jié)果:
　　3.1正常成纖維細胞與胃癌細胞BGCs在體外多次長期共培養(yǎng)誘導腫瘤細胞形成散在分布的短梭形細胞TBGCs;
　　3.2誘導后的腫瘤細胞增殖、遷移、侵襲能力增強，對順鉑的敏感性明顯降低;
　　3.3 TBGCs中E-鈣粘素表達顯著下降，而波型蛋白、β

7、-連環(huán)蛋白和N-鈣粘素表達升高，提示腫瘤細胞在長期高密度成纖維細胞作用下可能發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化;
　　3.4靜脈注射模型中，TBGCs組裸鼠早期即出現(xiàn)淋巴和腸道轉(zhuǎn)移能力;而BGCs組裸鼠則以肺臟轉(zhuǎn)移為主;
　　3.5皮下致瘤模型中TBGCs組裸鼠基本無成瘤能力，表現(xiàn)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力增強;
　　4.研究結(jié)論:
　　正常成纖維細胞可誘導胃癌細胞BGC-823s通過上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等機制轉(zhuǎn)化為新的細胞:TBGCs。這種細胞成