SKBR-3乳腺癌細(xì)胞中Hsp70與Her-2蛋白復(fù)合物的鑒定及其提取純化.pdf

1、乳腺癌是嚴(yán)重威脅婦女健康的疾病，占女性惡性腫瘤死亡率的首位，近年來，國內(nèi)外大量研究顯示：原癌基因Her—2在20％～30％的乳腺癌患者中可見擴(kuò)增和過度表達(dá)，該基因的擴(kuò)增及其過表達(dá)常提示腫瘤惡性程度高，可作為判斷乳腺癌預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立指標(biāo)。此外，大量研究表明，來源于腫瘤的組織或細(xì)胞中存在一種或多種不同水平熱休克蛋白的表達(dá)，其中熱休克蛋白70與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。隨著對(duì)熱休克蛋白70結(jié)構(gòu)、功能以及與其相關(guān)蛋白作用的了解，為腫瘤治療的研究

2、打開了新局面。本論文以SKBR—3乳腺癌細(xì)胞株為主要細(xì)胞株，探討了Hsp70—Her2蛋白復(fù)合物的鑒定、提取及純化的方法，擬建立一個(gè)穩(wěn)定、高效的分離、純化技術(shù)平臺(tái)，為探索新的乳腺癌個(gè)體化免疫治療奠定理論及實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 本文以高表達(dá)原癌基因Her—2的乳腺癌細(xì)胞株SKBR—3作為實(shí)驗(yàn)細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)其中Her—2的表達(dá)情況，結(jié)果顯示原癌基因Her—2在SKBR—3細(xì)胞株中高表達(dá)。經(jīng)免疫共沉淀方法檢測(cè)細(xì)胞株中Hsp70和Her

3、—2癌基因蛋白的存在形式：Her—2癌基因蛋白與Hsp70在細(xì)胞株中以復(fù)合物的形式存在。采用裂解液裂解、超聲破碎、高速離心、ConA Sepharose親和層析結(jié)合ADP agarose親和層析方法，從熱休克（42℃）處理后的人乳腺癌細(xì)胞株SKBR—3中分離純化出Hsp70/Her—2癌基因蛋白復(fù)合物，并通過十二烷基硫酸鈉—聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS—PAGE）、Westem—blot點(diǎn)印記進(jìn)行檢測(cè)，最后用PEG20000濃縮蛋白后用B