Her-2致敏的DCIK細(xì)胞對難治性乳腺癌細(xì)胞免疫治療的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 1.建立能誘導(dǎo)生成CTL的Her2多肽負(fù)載的CIK-DC共培養(yǎng)體系(即DCIK-P細(xì)胞)
　　 2.比較DCIK、DCIK-P細(xì)胞、表阿霉素、赫賽汀對乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用
　　 3.比較DCIK、DCIK-P細(xì)胞對Her-2陽性乳腺癌細(xì)胞和Her-2陰性乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用
　　 4.探討DCIK-P細(xì)胞特異性殺傷作用的可能機制
　　 方法：
　　 1.利用細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)體外

2、培養(yǎng)DCIK和DCIK-P細(xì)胞。
　　 2.流式細(xì)胞技術(shù)分析DCIK和DCIK-P細(xì)胞的表型以及RT-PCR分析細(xì)胞的基因型。
　　 3.CCK-8法檢測DCIK、DCIK-P細(xì)胞、表阿霉素、赫賽汀對乳腺癌細(xì)胞(SK-BR-3、MCF-7)的殺傷作用。
　　 4.采用Si-RNA干擾技術(shù)以及基因轉(zhuǎn)染技術(shù)調(diào)節(jié)SK-BR-3、MCF-7細(xì)胞的Her-2表達(dá)情況，再次用CCK-8法檢測DCIK-P細(xì)胞對調(diào)節(jié)后的乳腺癌細(xì)

3、胞殺傷作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.建立了DCIK-P共培養(yǎng)體系，流式細(xì)胞儀分析提示DCIK細(xì)胞有很高的NKT細(xì)胞含量并且加強了向CTL細(xì)胞分化的能力。并篩選出實驗所需的HLA-A2型細(xì)胞；篩選了具有不同特征的兩株乳腺癌細(xì)胞即SK-BR-3和MCF-7，它們分別為HLA-A2+Her2+、HLA-A2+Her2-；
　　 2.DCIK細(xì)胞、DCIK-P細(xì)胞、表阿霉素、赫賽汀對乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用負(fù)載Her2的D

4、CIK-P細(xì)胞對于高表達(dá)相關(guān)抗原的腫瘤細(xì)胞的殺傷活性明顯高于三個對照組，而對于低表達(dá)或不表達(dá)相關(guān)抗原的腫瘤細(xì)胞殺傷活性無明顯提高，表明DCIK-P細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞具有抗原特異性殺傷作用。
　　 3.DCIK-P細(xì)胞對Her-2表達(dá)不同的乳腺癌細(xì)胞殺傷作用可能機制采用SiRNA干擾技術(shù)下調(diào)SK-BR-3細(xì)胞Her-2表達(dá)量、同時采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)上調(diào)MCF-7細(xì)胞Her-2表達(dá)量，再次用CCK-8法檢測DCIK-P細(xì)胞對調(diào)節(jié)后的乳腺癌

5、細(xì)胞殺傷作用，對兩株乳腺癌細(xì)胞的殺傷率變化差別都有統(tǒng)計學(xué)意義，證明DCIK-P細(xì)胞對Her-2表達(dá)不同的乳腺癌細(xì)胞殺傷作用可能是通過調(diào)節(jié)Her-2這一靶點達(dá)到的。
　　 結(jié)論：
　　 1.和表阿霉素、赫賽汀以及DCIK細(xì)胞相比，DCIK-P細(xì)胞能明顯提高對Her-2陽性乳腺癌細(xì)胞的殺傷力。
　　 2.DCIK-P細(xì)胞對乳腺癌細(xì)胞的殺傷作用與細(xì)胞表達(dá)Her-2情況有關(guān)。
　　 3.DCIK-P細(xì)胞對Her-