腫瘤干細胞懸液致敏的樹突狀細胞對乳腺癌的治療作用研究.pdf

1、獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的內容以外，本論文不包含任何其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果，也不包含為獲得江蘇大學或其他教育機構的學位或證書而使用過的材料。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名：謝p I 歲年％月晴日江蘇大學碩士學位論文摘要目的：應用腫瘤干細胞抗原致

2、敏樹突狀細胞，制備腫瘤干細胞D C 疫苗，探討腫瘤干細胞D C 疫苗對乳腺癌荷瘤小鼠的免疫治療作用，為樹突狀細胞疫苗的臨床試驗提供理論和實驗基礎。方法：取對數(shù)生長期的4 T 1 細胞，用無血清懸浮培養(yǎng)法在體外誘導分離、擴增4 T 1 小鼠乳腺癌干細胞。用流式檢測干細胞表面標記C D 4 4 ，并用分化實驗和成瘤實驗鑒定干細胞的特性。分別用無關蛋白、4 T 1 細胞和4 T 1 腫瘤干細胞凍融抗原致敏D C ，制備成D C ．無關蛋白疫苗

3、、D C ．4 T 1 疫苗和D C ．B C S C 疫苗，并用流式進行D C 免疫表型的鑒定。用混合淋巴細胞反應( M L R ) 進行D C 功能的鑒定。建立B a l b ／c d x 鼠皮下4 T 1 E f L 腺癌移植瘤模型，經(jīng)尾靜脈注射D C 疫苗進行治療，密切觀察腫瘤生長情況和小鼠生存時間。移植瘤行H E 染色和免疫組織化學染色檢測C D 8 + T淋巴細胞浸潤情況。T r a n s w e l l 侵襲實驗觀察各組

4、移植瘤中腫瘤細胞的侵襲能力。結果：4 T 1 在無血清培養(yǎng)條件下，呈懸浮成球生長。流式結果顯示，經(jīng)S F M 誘導后的第1 、2 、3 、4 代腫瘤細胞微球體中C D 4 4 + ／C D 2 4 。細胞比例逐代升高，均顯著高于4 T 1 組( P < 0 ．0 5 ) 。成瘤實驗結果：與4 T 1 細胞相比，4 T 1 干細胞成瘤早且快，皮下移植瘤體積大。B C S C 微球體在含血清培養(yǎng)基中可重新分化為普通腫瘤細胞。未成熟D

5、C 的樹突短且少。D C 經(jīng)抗原致敏成熟后，突起數(shù)量增多且伸長。F C M 檢測結果顯示，未經(jīng)致敏的D C 低表達C D 8 0 、C D 8 6 、M H C I I 及C D l l c ，經(jīng)腫瘤細胞抗原致敏后，表達明顯升高( P < 0 ．0 5 ) 。M L R 結果：D C ：T 細胞相同條件下，D C ．B C S C 刺激T 細胞的刺激指數(shù)高于D C ．無關蛋白與D C ．4 T 1 的刺激指數(shù)( P < 0