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文檔簡介
1、目的:用弱酸洗脫提取CNE細胞膜表面的腫瘤抗原肽致敏臍血來源的DC<,s>,觀察對CTL的體外誘導作用并評價CTL介導的特異性抗CNE的免疫反應.方法:從健康臍血中采集單個核細胞(CBMNC),分離黏附細胞并于rhGM-CSF1000u/m、rhIL-4 500u/ml條件下培養(yǎng);檢測DC表型.以弱酸(pH3.3)處理CNE細胞5分鐘,洗脫其表面的HLA-I類抗原肽,流式細胞儀檢測洗脫率;OASIS-HLB小柱提取純化洗脫的抗原肽,致敏
2、DC<,s>;致敏DC<,s>與異體外周血T淋巴細胞混合培養(yǎng)產生CTL,<'3>H-TdR摻入法測定細胞的刺激指數;分別以DC<,s>、未經DC<,s>激活的混合T淋巴細胞及DC<,s>誘導的CTL作效應細胞對CNE細胞進行體外殺傷實驗.MTT法檢測殺傷率.結果:CBMNC貼壁獲得的黏附細胞經細胞因子序貫培養(yǎng)可高表達DC表面抗原CD86、CD1α、CD40、HLA-DR.弱酸可以洗脫CNE細胞膜表面絕大部分與MHC- I類分子結合的腫瘤
3、抗原肽,經此抗原肽致敏的DC<,s>,在體外可以激發(fā)特異性識別CNE細胞抗原肽的CD<,8><'+>CTL細胞株的增殖,產生特異性抗CNE的免疫反應.未致敏DC<,s>組和T細胞組無此反應.弱酸洗脫后的CNE細胞繼續(xù)培養(yǎng)48小時,其表面的HLA- I類腫瘤抗原肽重新表達.結論:CBMNC貼壁獲得黏附細胞后經細胞因子序貫培養(yǎng)可獲得DC<,s>.弱酸洗脫提取的CNE腫瘤細胞膜表面的腫瘤抗原肽致敏的DC<,s>在體外能夠誘導高效而特異的抗鼻咽
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