抗原致敏IL-12基因修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)抗腎癌免疫的體外研究.pdf

1、腎癌(RenalCellCarcinoma，RCC)是最常見(jiàn)的腎臟實(shí)質(zhì)性惡性腫瘤。樹(shù)突狀細(xì)胞在腫瘤免疫中的基礎(chǔ)地位確立以來(lái)，腎癌的免疫治療取得了較大的進(jìn)展。樹(shù)突狀細(xì)胞是目前公認(rèn)的體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原提呈細(xì)胞(antigenpresentingcell，APC)，是機(jī)體內(nèi)啟動(dòng)免疫反應(yīng)的關(guān)鍵因素。DC攝取腫瘤抗原，提呈抗原給T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxicTlymphocytes，CTL)增殖、活化，產(chǎn)生特異性抗腫瘤細(xì)胞

2、免疫。因此，構(gòu)建一種以DC為基礎(chǔ)的瘤苗，對(duì)DC進(jìn)行一定的修飾，以改善腫瘤局部的微環(huán)境、增強(qiáng)DC的免疫功能，進(jìn)而遏制腫瘤免疫逃脫。　　本研究將能發(fā)揮重要抗腫瘤作用的IL-12基因轉(zhuǎn)染DC，再用腫瘤粗提抗原Ⅰ致敏DC，構(gòu)建成一種以DC為基礎(chǔ)的多價(jià)瘤苗，使其在有效提呈抗原的同時(shí)又持續(xù)高分泌IL-12因子，更有效地誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖、活化，進(jìn)而誘導(dǎo)特異性抗腫瘤免疫。從分子及細(xì)胞學(xué)水平觀察DC多價(jià)瘤苗體外誘導(dǎo)自體T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生特異性抗腎癌免疫的

3、效能，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析。目的：1.第一部分：樹(shù)突狀細(xì)胞的體外擴(kuò)增培養(yǎng)。對(duì)傳統(tǒng)培養(yǎng)方法改良，掌握從外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中分離培養(yǎng)DC的方法。2.第二部分：以樹(shù)突狀細(xì)胞為基礎(chǔ)的DC多價(jià)瘤苗的制備。聯(lián)合用腫瘤抗原致敏和IL-12基因修飾方法，構(gòu)建一種以DC為基礎(chǔ)的多價(jià)瘤苗，并從分子水平上檢測(cè)該瘤苗的免疫狀態(tài)。3.第三部分：DC多價(jià)瘤苗誘導(dǎo)抗腎癌免疫的體外實(shí)驗(yàn)。在體外用DC多價(jià)瘤苗誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖、活化，從細(xì)胞水平上檢測(cè)該瘤苗的免疫效