人臍血樹突狀細胞體外培養(yǎng)及免疫功能的研究.pdf

1、目的：通過人臍血樹突狀細胞(Dendriticcells,DC)的體外培養(yǎng)，對DC進行形態(tài)學觀察及免疫表型檢測，探討其對抗腫瘤效應細胞CTL活性的影響。 方法：本研究首先在無菌條件下常規(guī)采集臍血，用淋巴細胞分離液分離臍血單個核細胞(cordbloodmononuclearcell，CMNC)。將獲得的單個核細胞(mononuclearcell，MNC)分為7組，每組加入3ml的RPMI-1640培養(yǎng)基，分別添加不同的細胞因子組合

2、誘導DC的生成。其中一組為對照組，不加任何細胞因子培養(yǎng)；另外6組分別添加rhIL-4和rhGM-CSF，其中3組在第五天再分別添加TNF-α。14d后，收集貼壁DC細胞，分別用流式細胞技術檢測CD83、CD86、CD14、HLA-DR等免疫表型。用MTT比色法檢測DC活化的T細胞與對照組細胞(異基因的淋巴細胞組)對人紅白血病細胞系K562細胞的殺傷作用。 結果：7組CMNC培養(yǎng)14天后，流式細胞技術檢測貼壁細胞中第六實驗組(10

3、00u/ml的rhIL-4和1000u/ml的rhGM-CSF，培養(yǎng)5天后加入TNF-α50u/ml)的HLA-DR，CD14，CD83和CD86高表達，與其他組相比較P＜0.05，CMNC誘導培養(yǎng)生成DC細胞的含量為，6組＞5組＞4組＞3組＞2組＞1組＞7組。應用MTT比色法測定從臍血誘導分化的DC活化的CTL細胞能特異殺傷K562腫瘤細胞，殺傷作用遠大于對照組(p＜0.05)，在效靶比為10∶1時殺傷作用最大(p＜0.01)，MTT