人外周血未成熟樹突狀細胞體外擴增、鑒定及抗成熟特性的研究.pdf

1、創(chuàng)面處理是成功救治大面積深度燒傷病人的關(guān)鍵問題之一，及時、有效的覆蓋創(chuàng)面，將對后續(xù)治療產(chǎn)生積極的影響。同種異體皮膚移植為創(chuàng)面的覆蓋提供了一條良好的思路，但因其具有抗原性，移植后的排斥反應(yīng)嚴重影響了治療效果。免疫抑制劑雖可延長其存活時間，但對于大面積燒傷病人而言，本身就處于一種免疫功能明顯低下狀態(tài)，大量抑制機體免疫力的抗排斥藥物的應(yīng)用反而增加了感染的危險性。因此誘導(dǎo)受體對供體皮膚產(chǎn)生特異性的免疫低下或免疫耐受狀態(tài)而同時保持受體正常的免疫功

2、能至關(guān)重要。 樹突狀細胞(dendriticcell，DC)是體內(nèi)功能最強的抗原呈遞細胞(antigen-presentingcell,APC)，是天然免疫和獲得性免疫的重要調(diào)節(jié)劑。因其來源、發(fā)育階段和細胞表型等的不同而存在功能異質(zhì)性。而未成熟DC由于其表面缺乏共刺激分子，不能夠提供T細胞活化所必需的共刺激信號，在免疫應(yīng)答過程中非但不能激活T細胞，反而可誘導(dǎo)其無能，從而成為誘導(dǎo)移植免疫耐受的重要靶細胞。雖然DC在體內(nèi)分布廣泛，但

3、數(shù)量少且分散，而未成熟DC主要分布在外周非淋巴組織內(nèi)，直接分離、提純十分困難，不能滿足體內(nèi)或體外研究及臨床應(yīng)用的需要。同時在大面積燒傷病人體內(nèi)存在著大量的內(nèi)毒素(lipopolysaccharide,LPS)、腫瘤壞死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)等促進DC成熟的物質(zhì)，因而明顯影響了其致耐效果。白介素-10(interleukin-10,IL-10)是一種抗炎性細胞因子，在同種異體混合淋巴細胞反應(yīng)中能

4、抑制T細胞的活化、增殖，有研究表明移植術(shù)前給予IL-10可延長移植物的存活時間。而DC又是T細胞活化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，推測其抑制作用可能是通過對APC功能的影響來實現(xiàn)的。 在本研究中，我們聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF和rhIL-4體外誘導(dǎo)、擴增人外周血分離的單個核細胞，第7d同時加入rhIL-10聯(lián)合培養(yǎng)，于第9d收獲細胞，從形態(tài)學(xué)、細胞表面標志物以及混合淋巴細胞反應(yīng)(MLR)中對同種異體未致敏T淋巴細胞刺激能力三個方面進行鑒定。并將培養(yǎng)

5、的細胞分別用LPS、TNF-α繼續(xù)刺激2天，再進行MLR，觀察IL-10對外周血單個核細胞來源的未成熟DC的影響，以期為體外獲得足夠數(shù)量的能保持良好穩(wěn)定性的未成熟DC打下一定的基礎(chǔ)。 本研究分兩部分進行：1、人外周血未成熟DC的體外擴增及鑒定；2、人外周血未成熟DC抗成熟特性的研究。 主要結(jié)果：1、培養(yǎng)細胞懸浮生長，表面可見毛刺狀突起，體積較前增大；熒光顯微鏡下可見細胞膜表面染有綠色熒光，呈明顯的不規(guī)則的突起；電鏡下細胞

6、形態(tài)不規(guī)則，表面粗糙，有大量不規(guī)則突起，層疊狀皺襞明顯可見。 2、培養(yǎng)細胞的表型為CD1a++HLA-DR+CD83-CD40-CD86+/-，其表面共刺激分子CD40、CD86的表達率明顯低于對照組，細胞表面HLA-DR的平均熒光強度較對照組顯著下降。 3、MLR中，培養(yǎng)細胞不能刺激同種異體未致敏T淋巴細胞的增殖。 4、培養(yǎng)細胞與LPS、TNF-α聯(lián)合孵育后，在MLR中亦不能刺激同種異體未致敏T淋巴細胞的增殖。