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1、在大面積深度燒傷患者的救治工作中,及時(shí)有效的創(chuàng)面覆蓋是治療的關(guān)鍵。同種異體皮膚移植為創(chuàng)面覆蓋提供了良好的思路。但目前臨床上移植后的排斥反應(yīng)嚴(yán)重影響了治療效果。免疫抑制劑可以延長(zhǎng)異體皮的存活時(shí)間,但大劑量抗排斥藥物的應(yīng)用同時(shí)增加了患者感染的危險(xiǎn)性。通過(guò)攜帶供者抗原的不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)異基因皮膚移植耐受為延長(zhǎng)異體皮成活時(shí)間的有效途徑。 樹(shù)突狀細(xì)胞(dendriticcell,DC)是體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(antigen-pr
2、esentingcell,APC),是天然免疫和獲得性免疫的重要調(diào)節(jié)劑。在樹(shù)突狀細(xì)胞的發(fā)育過(guò)程中,不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞(immaturedendriticcell,imDC)與成熟DC(maturedendriticcell,mDC)在表型特征以及生物學(xué)功能上都有區(qū)別。imDC由于其細(xì)胞表面缺乏MHC-Ⅱ類(lèi)分子和共刺激分子,在免疫應(yīng)答過(guò)程中非但不能激活T細(xì)胞,反而能誘導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞無(wú)能或凋亡,在誘導(dǎo)抗原特異性免疫耐受中發(fā)揮了重要作用。i
3、mDC穩(wěn)定性差,在正常培養(yǎng)條件下難以長(zhǎng)期保存,臨床上使用的異體皮都來(lái)自死后捐贈(zèng)者,同時(shí)燒傷發(fā)生具有極大的偶然性,如何長(zhǎng)期有效的保存攜帶供者抗原的不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞并保持其不成熟特性成為問(wèn)題的關(guān)鍵。本實(shí)驗(yàn)研究臍血來(lái)源的不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞低溫凍存前后所表現(xiàn)的生物特性,為不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞的臨床應(yīng)用提供保存方法。 在本研究中,我們?nèi)⌒迈r臍血分離單個(gè)核細(xì)胞,在體外經(jīng)粒系—巨噬細(xì)胞系集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)誘導(dǎo)產(chǎn)生不成
4、熟樹(shù)突狀細(xì)胞,加10%二甲基亞砜(dimethylsulfoxide,DMSO)/5%二甲基亞砜(DMSO)+6%羥乙基淀粉(hydroxyethylstarch,HES)作為保護(hù)劑,-80℃冰箱降溫,-196℃保存,35~40℃水浴復(fù)溫,獲得凍存不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞。光鏡下觀(guān)察臺(tái)盼藍(lán)拒染回收率;電鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài);流式細(xì)胞儀檢測(cè)兩組細(xì)胞表面成熟標(biāo)志(CD80、CD83和CD86);混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(mixedlymphocytereact
5、ion,MLR)檢測(cè)兩組細(xì)胞刺激未致敏T淋巴細(xì)胞增殖能力。 主要結(jié)果: 1.培養(yǎng)細(xì)胞體積增大,表面可見(jiàn)毛刺樣不規(guī)則突起,電鏡下細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,表面粗糙,明顯可見(jiàn)突起及皺襞;細(xì)胞表型具有典型的DC特征(CD1a、CD14、CD80、CD83、CD86、HLA-DR的表達(dá)率分別為62.49%,18.28%,12.46%,4.60%,11.51%,67.4%);混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)中細(xì)胞不能刺激同種未致敏T淋巴細(xì)胞增殖。
6、 2.應(yīng)用高濃度DMSO作保護(hù)劑的凍存不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞和應(yīng)用低濃度DMSO的細(xì)胞,臺(tái)盼藍(lán)拒染回收率(trypanbluerecoveryrate,TBRR)均大于85%,其細(xì)胞形態(tài)、成熟相關(guān)表型抗原(CD80、CD83和CD86)并未發(fā)生明顯改變;不能刺激同種未致敏T淋巴細(xì)胞增殖的能力與新鮮不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞無(wú)顯著性差異。 主要結(jié)論: 1.本實(shí)驗(yàn)獲得的不成熟樹(shù)突狀細(xì)胞細(xì)胞具有典型的DC形態(tài),在細(xì)胞表型和細(xì)胞功能試驗(yàn)
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