內(nèi)毒素對人樹突狀細(xì)胞影響的體外研究.pdf

1、目的：本研究取正常人外周血單個核細(xì)胞(PBMC)，建立體外誘導(dǎo)培養(yǎng)樹突狀細(xì)胞(DC)的方法，進(jìn)而探討內(nèi)毒素對人DC成熟的影響。 方法：用rhGM-CSF、rhIL-4、Flt3-L和TNF-α體外誘導(dǎo)人外周血單個核細(xì)胞向DC分化，培養(yǎng)12天后收集DC。將細(xì)胞分為六組：①無LPS處理組；②0.5μg/mlLPS處理組；③1μg/mlLPS處理組；④1.5μg/mlLPS處理組；⑤2μg/mlLPS處理組；⑥5μg/ml的LPS處理

2、組。LPS均在培養(yǎng)的第11天加入。應(yīng)用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測DC的表型，通過混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)檢測DC刺激T淋巴細(xì)胞的能力，用ELISA法檢測DC分泌細(xì)胞因子IL-12、IFN-γ的水平。 結(jié)果：1、體外培養(yǎng)12天后獲得形態(tài)典型的DC，細(xì)胞存活率均在90％以上。 2、培養(yǎng)第1天細(xì)胞CD14表達(dá)較高，CD80、CD83、CD86及HLA-DR表達(dá)較低，而培養(yǎng)12天后，CD14表達(dá)明顯降低，CD80、CD

3、83、CD86及HLA-DR表達(dá)明顯升高。不同濃度LPS處理組與無LPS處理組相比，這種趨勢更加明顯(P＜0.05)，但與LPS劑量依賴性不明顯(P＞0.05)。 3、不同濃度LPS處理組刺激同種異體T細(xì)胞增殖的能力均高于無LPS處理組(P＜0.05)，與LPS劑量依賴性不明顯(P＞0.05)。 4、不同濃度LPS處理組分泌IL-12和IFN-γ的能力明顯高于無LPS處理組(P＜0.05)，與LPS劑量依賴性不明顯(P＞

4、0.05)。 結(jié)論：取正常人PBMC，聯(lián)合應(yīng)用rhGM-CSF(1000u/ml)，rhIL-4(1000u/ml)，rhFlt3-L(50ng/ml)及TNF-α(1000u/ml)，在體外可誘導(dǎo)出具有典型形態(tài)、表型及生物學(xué)活性的DC。經(jīng)LPS處理后DC發(fā)育更加成熟，表現(xiàn)為突起更加明顯，特征性表面分子表達(dá)更高，刺激同種異體T淋巴細(xì)胞增殖的能力更強(qiáng)，分泌相關(guān)細(xì)胞因子的能力更高，在一定濃度范圍內(nèi)，這種特性與LPS劑量依賴性不明顯。