臍血造血干-祖細胞體外擴增實驗研究.pdf

1、目的:探討人臍血(Umbilical cord blood,UCB)造血干/祖細胞(Hematopoietic stem/progenitor cells,HSC/HPC)在適合臨床移植條件下體外擴增以獲得理想的造血干/祖細胞數量的最佳細胞因子組合及擴增時間,為UCB經體外擴增后成為高體重受者克服臍血移植(Umbilical cord bloodtransplantation,UCBT)細胞數量不足及縮短植入時間提供客觀指標.方法:采集

2、UCB10份,分離單個核細胞(mononuclear,MNC),免疫磁珠分選(MiniMACS)CD34<'+>細胞,4份UCB CD34<'+>細胞分別在在細胞因子組合為A:SCF+FL+TPO、B:SCF+FL+TPO+IL-3及C:SCF+FL+TPO+G-CSF支持的無血清、無基質的液體培養(yǎng)基中擴增培養(yǎng)14天,收集擴增前、擴增后7天及14天的細胞進行細胞表型分析、半固體集落培養(yǎng)及端粒酶活性分析.結果:在含細胞因子IL-3組擴增培

3、養(yǎng)第7天及第14天,均獲得了總有核細胞數(Total nucleated cells,TNC)及集落形成細胞(colony-forming cell,CFC)最大的擴增倍數.擴增第7天,IL-3組的CD34<'+>細胞擴增倍數為(10.11±7.21)倍,較其它兩組稍低,但無統(tǒng)計學意義;三組CD<,33><'+>細胞、CD<,41><'+>細胞、CD<,71><'+>細胞也得到了較大程度的擴增,IL-3組高于其它兩組;三組擴增后的細胞端

4、粒酶活性均上調,其OD值達最高,含IL-3組低于含G-CSF組(P=0.008).隨著擴增時間的延長,擴增后的細胞端粒酶活性均下降;CD34<'+>細胞占TNC的比例也明顯下降,其它定向祖細胞的比例也出現先升高后下降的現象.結論:在SCF、FL、TPO及IL-3存在下,單份UCB的部分體外擴增7天內,可獲得較大量的TNC及HPC,同時定向祖細胞的比例得以提高,與以配合支持長期植入的非擴增的UCB細胞共同組成移植物,從而加速移植早期的植入