臍帶源間充質(zhì)干細(xì)胞對臍血干-祖細(xì)胞體外擴(kuò)增影響的研究.pdf

1、本文研究工作分為兩部分： 第一部分：目的：探討應(yīng)用臍帶源MSC作基質(zhì)層的體外培養(yǎng)體系對臍血CD34<'+>細(xì)胞的體外擴(kuò)增效率，并進(jìn)一步探討臍帶源MSC促進(jìn)臍帶血造血干祖細(xì)胞的增殖分化的機(jī)制。 方法： 1.應(yīng)用貼壁培養(yǎng)的方法從正常足月出生兒臍帶中分離培養(yǎng)MSC，通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)、免疫表型、分化實驗進(jìn)行鑒定。 2.利用免疫磁珠分離法從正常足月出生兒臍帶血中分離CD34<'+>細(xì)胞。應(yīng)用三種不同培養(yǎng)體系進(jìn)行臍血C

2、D34<'+>細(xì)胞的體外擴(kuò)增：單獨(dú)應(yīng)用臍帶源MSC作基質(zhì)層、細(xì)胞因子培養(yǎng)體系和MSC聯(lián)合細(xì)胞因子培養(yǎng)體系。 3.對擴(kuò)增后細(xì)胞數(shù)量、集落形成能力和免疫表型進(jìn)行分析比較。 4.以RT-PCR檢測臍帶源MSC中SCF、GM-CSF、TPO等細(xì)胞因子的表達(dá)情況。 結(jié)果： 1.三組不同培養(yǎng)體系中，以MSC聯(lián)合細(xì)胞因子組的細(xì)胞總數(shù)增長最快，在培養(yǎng)第4、7、10、14天細(xì)胞總數(shù)均明顯高于另兩組；在培養(yǎng)第4天時，MSC組

3、細(xì)胞總數(shù)增長最慢，隨后漸加快，至培養(yǎng)第7天后MSC組細(xì)胞總數(shù)與細(xì)胞因子組無明顯差異。 2.三組培養(yǎng)體系中，以MSC聯(lián)合細(xì)胞因子組的CD34<'+>細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)最高，培養(yǎng)第7天增長(3.04±0.84)倍，在第7天之后增長漸緩，其在第7天和第14天的CD34<'+>細(xì)胞的擴(kuò)增倍數(shù)明顯高于細(xì)胞因子組，但較MSC組的差異無統(tǒng)計學(xué)意義；MSC組在培養(yǎng)第7天以后CD34<'+>細(xì)胞總數(shù)增長速度有增高趨勢，在培養(yǎng)第14天為培養(yǎng)前的(4.1

4、9±1.37)倍。 3.除第4天的CFU-GEMM外，在擴(kuò)增其它各時段MSC聯(lián)合細(xì)胞因子組的各集落擴(kuò)增倍數(shù)均明顯高于細(xì)胞因子組。擴(kuò)增第7天時，MSC組的BFU-E、CFU-GEMM和HPP-CFU集落擴(kuò)增總數(shù)明顯高于細(xì)胞因子組；擴(kuò)增第14天時，MSC組的CU-GM、CFU-GEMM和HPP-CFU集落擴(kuò)增總數(shù)均明顯高于細(xì)胞因子組。在擴(kuò)增第7天時，除HPP-CFU外，MSC聯(lián)合細(xì)胞因子組的其它集落擴(kuò)增倍數(shù)較MSC組無明顯差異；培養(yǎng)

5、第14天時，MSC聯(lián)合細(xì)胞因子組的CFU-GM和CFU-GEMM：集落總數(shù)明顯高于MSC組，而BFU-E和HPP-CFU產(chǎn)量二者無明顯差異。 4.在培養(yǎng)7天時，細(xì)胞因子組的CD34<'+>細(xì)胞比例為(6.99±1.50)％，MSC組為(16.37±4.05)％，細(xì)胞因子聯(lián)合：MSC組為(5.83±0.85)％；雖然MSC組的CD34’細(xì)胞比例較高，但差異并無統(tǒng)計學(xué)意義(P值分別為0.065和0.099)。在培養(yǎng)第14天后，三組的

6、CD34<'+>細(xì)胞比例分別降為(1.51±0.34)％、(2.64±0.45)％和(0.98±0.14)％，MSC組明顯高于細(xì)胞因子聯(lián)合MSC組(P=0.012)，與細(xì)胞因子組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.109)。 5.培養(yǎng)第7天和培養(yǎng)第14天，MSC組體系的CD34<'+>CD38<'->細(xì)胞亞群比例均高于另兩組。在培養(yǎng)第7天時，三組之中MSC組的CD34<'+>CD33<'+>亞群細(xì)胞比例最高；在第14天時，雖然MSC組的此

7、亞群細(xì)胞仍高于其它兩組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。MSC組的髓系祖細(xì)胞表型CD34<'+>CD13<'+>亞群細(xì)胞在培養(yǎng)第7天和第14天時均高于另兩組。 6.RT-PCR結(jié)果顯示，臍帶源MSC體外可表達(dá)SCF和TPO等早期干細(xì)胞作用因子。 結(jié)論：單獨(dú)應(yīng)用臍帶源MSC可有效的對臍血CD34<'+>細(xì)胞進(jìn)行體外擴(kuò)增，聯(lián)合低劑量的細(xì)胞因子表現(xiàn)出部分聯(lián)合作用。臍帶源MSC促進(jìn)CD34<'+>細(xì)胞向各種造血定向祖細(xì)胞增殖分化的同時，可能

8、更有利于保持較早期干祖細(xì)胞的擴(kuò)增，其可能是通過分泌一些促進(jìn)造血的細(xì)胞因子而發(fā)揮促造血作用。 第二部分：目的：探討高危侵襲性T細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)的臨床特征、治療與預(yù)后。 方法：對國際預(yù)后指數(shù)評分為中高?；蚋呶５?4例侵襲性T-NHL，按WHO分類標(biāo)準(zhǔn)分型，對其臨床特點(diǎn)、治療情況和生存情況進(jìn)行回顧性分析。 結(jié)果： 1.54例侵襲性T-NHL中，T淋巴母細(xì)胞淋巴瘤(TLBL)12例(22.2％)，

9、非特殊型外周T細(xì)胞淋巴瘤(PTCL-U)31例(57.4％)，肝脾T細(xì)胞淋巴瘤(HSTCL)11例(20.4％)。IPI評分中高危12例(22.2％)，高危42例(77.8％)；其中侵犯骨髓49例(90.7％)，侵犯腦膜7例(13.0％)。 2.52例接受治療的患者中有34例(65.4％)達(dá)CR，11例(21.2％)PR，7例無效(13.5％)，治療總反應(yīng)率(CR+PR)為86.5％。中位生存期11.9(1.7～91.0)個月，

10、3年總體生存(OS)率為16.0％，中位無進(jìn)展生存(PFS)時間為10.0(0～90.0)個月。 3.造血干細(xì)胞移植治療組、化療組的3年OS率分別為44.4％、和8.3％，中位生存時間分別為36.0個月和11-3個月(P=0.023)；兩組的3年P(guān)FS率分別為21.9％和5.5％，中位：PFS時間分別為31.7個月和7.3個月(P=0.008)。強(qiáng)化CHOP方案治療較傳統(tǒng)CHOP方案有較高的緩解率，CR率分別為87.0％和51.

11、7％(P=0.009)；兩者的3年0S率分別為27.6％和7.7％(P=0.012)，3年P(guān)FS率分別為14.3％和7.2％(P=0.011)。 4.多因素生存分析結(jié)果顯示治療選擇、化療療效是影響預(yù)后的主要因素(P值分別為0.027和0.006)；而年齡、性別、IPI評分、LDH水平、侵犯骨髓及侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)對預(yù)后無明顯影響。 結(jié)論：T-NHL是一組高度異質(zhì)性腫瘤。中高危、高危T-NHL，尤其是PTCL-U和TLBL，