血小板裂解液對人臍帶間充質(zhì)干細胞體外成軟骨分化的影響.pdf

1、目的:探討血小板裂解液(plateletlyaste,PL)在體外定向誘導人臍帶間充質(zhì)干細胞(humanumbilicalcordderivedmesenchymalstemcells,hUCMSCs)分化成軟骨細胞中的作用。
　　 方法:采用膠原酶消化法分離hUCMSCs,體外培養(yǎng)擴增,流式細胞儀進行細胞表型鑒定。根據(jù)加入誘導培養(yǎng)基成分不同將實驗分為以下3組:A組為H-DMEM培養(yǎng)基、10%FBS及10%PL,B組為H-DME

2、M培養(yǎng)基、10%FBS、10ng/mLTGF-β1、1×10-7mol/L地塞米松、50ug/mL維生素C及1%胰島素鐵硒傳遞蛋白(Insulin-Transferrin-Selenium,ITS),C組為H-DMEM培養(yǎng)基、10%FBS、10ng/mLTGF-β1、1×10-7mol/L地塞米松、50ug/mL維生素C、1%ITS及10%PL。誘導培養(yǎng)2周,甲苯胺藍染色檢測各組軟骨細胞基質(zhì)的分泌,免疫熒光檢測軟骨特異性Ⅱ型膠原表達,半

3、定量RT-PCR檢測蛋白聚糖(Aggrecan)和Ⅱ型膠原表達。
　　 結(jié)果:分離得到的hUCMSCs不表達造血細胞的表面標記CD45、CD34和HLA-DR,而表達黏附分子和MSCs表面標記CD44、CD105和CD146。甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫熒光染色示C組呈陽性,B組呈弱陽性,而A組均呈陰性。半定量RT-PCR檢測示Aggrecan和Ⅱ型膠原在B、C組中均有表達,而A組中未見表達;B、C組的AggrecanmRNA和Ⅱ