低氧培養(yǎng)對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化特性的影響.pdf

1、目的：體外分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞并對其進(jìn)行鑒定，探討體外低氧培養(yǎng)環(huán)境對其成軟骨分化能力的影響。
　　 方法：采用酶消化法分離培養(yǎng)人臍帶沃頓膠組織來源間充質(zhì)干細(xì)胞，加入含10％FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基中進(jìn)行原代培養(yǎng)；待細(xì)胞生長至80～90％融合時，1:3傳代培養(yǎng)。通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，采用MTT法檢測細(xì)胞增殖能力，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面抗原。取傳3代細(xì)胞采用條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)其向成軟骨方向分化，根據(jù)培養(yǎng)氧濃度分

2、為實驗組(2％氧濃度)及對照組(20％氧濃度)。誘導(dǎo)2周后細(xì)胞爬片進(jìn)行甲苯胺藍(lán)染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測HIF-1α、Sox-9及CoL2al mRNA表達(dá)，研究低氧環(huán)境對人臍帶干細(xì)胞成軟骨分化的影響。
　　 結(jié)果：原代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁生長，初始細(xì)胞形態(tài)呈短梭形、梭形或多角形；傳代后細(xì)胞多呈均一的成纖維樣細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞貼壁和增殖速度明顯加快，呈平行排列生長或旋渦狀生長；MTT法檢測第3、5、7代臍帶干細(xì)胞均

3、具有較強(qiáng)的增殖能力；流式細(xì)胞儀檢測傳3代臍帶干細(xì)胞95％表達(dá)CD29，96％表達(dá)CD44，僅有0.8％表達(dá)CD45、1.8％表達(dá)CD31，與間充質(zhì)干細(xì)胞表面抗原表達(dá)一致；誘導(dǎo)2周后低氧培養(yǎng)組細(xì)胞甲苯胺蘭染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色均顯示強(qiáng)陽性反應(yīng)，胞漿及胞膜異染明顯，而對照組染色顯示弱陽性反應(yīng)；RT-PCR檢測結(jié)果顯示實驗組HIF-1α、Sox-9及CoL2al mRNA表達(dá)均顯著強(qiáng)于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。