人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖與分化培養(yǎng)的影響.pdf

1、目的：間充質(zhì)干細(xì)胞是一種具有多向分化能力的成體干細(xì)胞，在體外能誘導(dǎo)分化成為成骨細(xì)胞，脂肪細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞等。在實(shí)驗(yàn)中，間充質(zhì)干細(xì)胞移植能改善機(jī)體損傷修復(fù)。神經(jīng)損傷是一種比較難修復(fù)的機(jī)體損傷，神經(jīng)干細(xì)胞移植能改善神經(jīng)損傷的修復(fù)，神經(jīng)干細(xì)胞與間充質(zhì)干細(xì)胞的共移植更能加快修復(fù)過程。因此推測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞能對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞產(chǎn)生影響，加快神經(jīng)損傷的修復(fù)。為了驗(yàn)證我們的推測(cè)，我們?cè)O(shè)計(jì)了體外共培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞，研究間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分

2、化的影響，探討其作用機(jī)制，為間充質(zhì)干細(xì)胞的運(yùn)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和含小鼠神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)球，利用干細(xì)胞的定義即自我更新和多向分化潛能進(jìn)行鑒定培養(yǎng)出的細(xì)胞是干細(xì)胞。利用腺病毒使培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞帶上綠色熒光蛋白標(biāo)記，與培養(yǎng)的含神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)球共培養(yǎng)，觀察通過神經(jīng)球結(jié)構(gòu)的變化，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線和神經(jīng)干細(xì)胞分化程度確定間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)球在增殖培養(yǎng)條件下的影響；通過檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細(xì)胞，

3、少突膠質(zhì)細(xì)胞的分化能力改變確定間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞在分化培養(yǎng)條件下的影響。 NIBP是一種新發(fā)現(xiàn)的與NF-k B信號(hào)通路中的NIK和IKK2結(jié)合的蛋白，通過RNA干擾(RNAi)技術(shù)降低神經(jīng)干細(xì)胞中NIBP的表達(dá)能阻止神經(jīng)干細(xì)胞從神經(jīng)球里的遷出，通過半定量PCR檢測(cè)間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞的NIBP表達(dá)，研究間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞影響的機(jī)理。 結(jié)果：培養(yǎng)出人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，成功誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞，脂肪細(xì)胞，心肌

4、樣細(xì)胞分化；成功培養(yǎng)出含神經(jīng)干細(xì)胞的神經(jīng)球，神經(jīng)球里約由80％的細(xì)胞表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞標(biāo)記物Nestin，培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞能成功的誘導(dǎo)成神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細(xì)胞，少突膠質(zhì)細(xì)胞。間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)球在增殖條件下的共培養(yǎng)，神經(jīng)球由于細(xì)胞遷移出神經(jīng)球而導(dǎo)致神經(jīng)球離解，而運(yùn)用間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基在增殖條件培養(yǎng)神經(jīng)球，能得到同樣的結(jié)果，說明間充質(zhì)干細(xì)胞是通過分泌相關(guān)的細(xì)胞因子影響了神經(jīng)干細(xì)胞。在用間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基在增殖條件下培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，與對(duì)照

5、相比，細(xì)胞的增殖能力沒有改變；在用間充質(zhì)干細(xì)胞條件培養(yǎng)基在分化條件下培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，得出間充質(zhì)干細(xì)胞分泌的相關(guān)因子能增加神經(jīng)干細(xì)胞向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化的能力，而減少向星形膠質(zhì)細(xì)胞分化的能力。NIBP的低表達(dá)能使神經(jīng)干細(xì)胞遷移能力降低，而間充質(zhì)干細(xì)胞能使神經(jīng)干細(xì)胞的NIBP表達(dá)增高。 結(jié)論：間充質(zhì)干細(xì)胞能通過分泌相關(guān)的細(xì)胞因子作用于神經(jīng)干細(xì)胞，使細(xì)胞NIBP表達(dá)增強(qiáng)而增加神經(jīng)干細(xì)胞的遷移能力，同時(shí)使神經(jīng)干細(xì)胞向少突膠質(zhì)細(xì)胞分化能力