人骨髓間充質(zhì)干細胞對神經(jīng)干細胞增殖與分化培養(yǎng)的影響.pdf

1、目的：間充質(zhì)干細胞是一種具有多向分化能力的成體干細胞，在體外能誘導分化成為成骨細胞，脂肪細胞，神經(jīng)細胞等。在實驗中，間充質(zhì)干細胞移植能改善機體損傷修復。神經(jīng)損傷是一種比較難修復的機體損傷，神經(jīng)干細胞移植能改善神經(jīng)損傷的修復，神經(jīng)干細胞與間充質(zhì)干細胞的共移植更能加快修復過程。因此推測間充質(zhì)干細胞能對神經(jīng)干細胞產(chǎn)生影響，加快神經(jīng)損傷的修復。為了驗證我們的推測，我們設計了體外共培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞與神經(jīng)干細胞，研究間充質(zhì)干細胞對神經(jīng)干細胞增殖和分

2、化的影響，探討其作用機制，為間充質(zhì)干細胞的運用提供實驗依據(jù)。 方法：培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞和含小鼠神經(jīng)干細胞的神經(jīng)球，利用干細胞的定義即自我更新和多向分化潛能進行鑒定培養(yǎng)出的細胞是干細胞。利用腺病毒使培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細胞帶上綠色熒光蛋白標記，與培養(yǎng)的含神經(jīng)干細胞的神經(jīng)球共培養(yǎng)，觀察通過神經(jīng)球結(jié)構(gòu)的變化，細胞生長曲線和神經(jīng)干細胞分化程度確定間充質(zhì)干細胞對神經(jīng)球在增殖培養(yǎng)條件下的影響；通過檢測神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細胞，

3、少突膠質(zhì)細胞的分化能力改變確定間充質(zhì)干細胞對神經(jīng)干細胞在分化培養(yǎng)條件下的影響。 NIBP是一種新發(fā)現(xiàn)的與NF-k B信號通路中的NIK和IKK2結(jié)合的蛋白，通過RNA干擾(RNAi)技術降低神經(jīng)干細胞中NIBP的表達能阻止神經(jīng)干細胞從神經(jīng)球里的遷出，通過半定量PCR檢測間充質(zhì)干細胞對神經(jīng)干細胞的NIBP表達，研究間充質(zhì)干細胞對神經(jīng)干細胞影響的機理。 結(jié)果：培養(yǎng)出人骨髓間充質(zhì)干細胞，成功誘導間充質(zhì)干細胞向成骨細胞，脂肪細胞，心肌

4、樣細胞分化；成功培養(yǎng)出含神經(jīng)干細胞的神經(jīng)球，神經(jīng)球里約由80％的細胞表達神經(jīng)干細胞標記物Nestin，培養(yǎng)的神經(jīng)干細胞能成功的誘導成神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細胞，少突膠質(zhì)細胞。間充質(zhì)干細胞與神經(jīng)球在增殖條件下的共培養(yǎng)，神經(jīng)球由于細胞遷移出神經(jīng)球而導致神經(jīng)球離解，而運用間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基在增殖條件培養(yǎng)神經(jīng)球，能得到同樣的結(jié)果，說明間充質(zhì)干細胞是通過分泌相關的細胞因子影響了神經(jīng)干細胞。在用間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基在增殖條件下培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，與對照

5、相比，細胞的增殖能力沒有改變；在用間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基在分化條件下培養(yǎng)神經(jīng)干細胞，得出間充質(zhì)干細胞分泌的相關因子能增加神經(jīng)干細胞向少突膠質(zhì)細胞分化的能力，而減少向星形膠質(zhì)細胞分化的能力。NIBP的低表達能使神經(jīng)干細胞遷移能力降低，而間充質(zhì)干細胞能使神經(jīng)干細胞的NIBP表達增高。 結(jié)論：間充質(zhì)干細胞能通過分泌相關的細胞因子作用于神經(jīng)干細胞，使細胞NIBP表達增強而增加神經(jīng)干細胞的遷移能力，同時使神經(jīng)干細胞向少突膠質(zhì)細胞分化能力