混合人臍帶血清對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、研究背景及目的:間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)是一種來源于中胚層，具有自我復(fù)制能力和多向分化潛能的成體干細(xì)胞。目前已成為組織修復(fù)工程和再生醫(yī)學(xué)理想的種子細(xì)胞，具有巨大的臨床應(yīng)用前景。
　　 目前，國(guó)內(nèi)外間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)方法有多種，但傳統(tǒng)的體外培養(yǎng)都需要添加胎牛血清或小牛血清。但胎牛血清增加了病毒或細(xì)菌感染風(fēng)險(xiǎn)，異體蛋白輸入人體同時(shí)也增加了發(fā)生過敏反應(yīng)的危險(xiǎn)。因此，尋找“人源化”胎牛血

2、清替代品成為研究熱點(diǎn)。人臍帶血血清中含有豐富的細(xì)胞因子，具有采集方便，來源廣泛，對(duì)母親及胎兒無影響，CMV、EB病毒污染率低，低免疫性等優(yōu)勢(shì)，因此為臨床應(yīng)用提供了一種更安全高效的培養(yǎng)方法。
　　 本研究工作分兩部分:
　　 第一部分:混合人臍帶血清、自體血清與胎牛血清培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性的鑒定及各組增殖效能的比較
　　 方法:無菌條件下取10例人骨髓標(biāo)本，采用密度梯度離心法提取單個(gè)核細(xì)胞，分別用含體

3、積分?jǐn)?shù)為10％的混合人臍帶血清、10％的自體血清、10％的胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基，行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)，觀察細(xì)胞形態(tài)，取第3代細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞表面標(biāo)志及行成骨、脂肪誘導(dǎo)分化，以鑒定MSCs的生物學(xué)特性，并比較在三組培養(yǎng)體系中MSCs細(xì)胞的增殖效能。
　　 結(jié)果:混合人臍帶血清組、自體血清組與胎牛血清組培養(yǎng)的MSCs細(xì)胞形態(tài)上無明顯差異;混合人臍帶血清組培養(yǎng)的第3代MSCs表達(dá) CD73、CD105的陽性率均在95％以上

4、，高于自體血清組、FBS血清組(P＜0.05)，而CD34、CD45的陽性率各組均在2％以下;混合人臍帶血清組、自體血清組、FBS組培養(yǎng)的骨髓MSCs誘導(dǎo)為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)?；旌先四殠а褰M在增殖速度和細(xì)胞數(shù)量上的優(yōu)勢(shì)明顯，胎牛血清次之，自體血清組較差。
　　 結(jié)論:混合人臍帶血清組、自體血清組、FBS組培養(yǎng)的MSCs經(jīng)鑒定均符合MSCs診斷標(biāo)準(zhǔn);在混合人臍帶血清培養(yǎng)體系中，MSCs增殖效

5、能優(yōu)于FBS、自體血清組。
　　 第二部分:不同體積分?jǐn)?shù)混合人臍帶血清對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的影響
　　 方法:無菌條件下取10例人骨髓標(biāo)本，采用密度梯度離心法提取單個(gè)核細(xì)胞，分別用體積分?jǐn)?shù)為5％、7.5％、10％、15％、20％的臍血清+DMEM/F12培養(yǎng)基，行骨髓間充質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)，在原代培養(yǎng)及第三代培養(yǎng)末行細(xì)胞計(jì)數(shù)，取第3代細(xì)胞，用MTT法觀察不同體積分?jǐn)?shù)的臍血清對(duì)MSCs的增殖能力的影響。
　　 結(jié)果:在7.5