miRNAs對骨髓間充質(zhì)干細胞分化的影響.pdf

1、研究背景：
　　miRNA(microRNA)是一類短小的非編碼單鏈小分子RNA，通過轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)對基因表達發(fā)揮著重要調(diào)控作用。多項研究表明，miRNA在細胞增殖、分化、凋亡、分泌、遷移、惡性轉(zhuǎn)化等細胞功能方面存在重要調(diào)控功能，在生物體的生長發(fā)育、信號轉(zhuǎn)導通路、組織器官分化、疾病的發(fā)生發(fā)展等復雜的生物學過程中亦扮演著重要角色。骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)是一類具有多向分化潛能的干細胞，可以分化為多種中胚層細胞及數(shù)種非中胚層細胞。已經(jīng)

2、有很多研究證明骨髓間充質(zhì)干細胞分化異常在諸如股骨頭壞死、骨質(zhì)疏松等疾病當中扮演著重要角色。miRNA通過對大量基因進行轉(zhuǎn)錄后調(diào)控，對骨髓間充質(zhì)干細胞的分化方向產(chǎn)生重要的調(diào)控作用。本研究擬在本課題組前期研究的基礎上對此前篩選出的miRNAs進行功能驗證，明確其對骨髓間充質(zhì)干細胞分化方向的影響。
　　研究目的：
　　1.復蘇、培養(yǎng)、傳代BMSC，用生物信息學方法對此前研究所得miRNA進行篩選;
　　2.定制agomir及

3、antagomir，通過轉(zhuǎn)染改變骨髓間充質(zhì)干細胞內(nèi)相應miRNA的水平，通過染色研究轉(zhuǎn)染后骨髓間充質(zhì)干細胞分化方向，從而篩選出對骨髓間充質(zhì)干細胞分化方向存在影響的miRNA;
　　3.采用全基因組芯片檢測受到miRNA調(diào)控的靶基因及其表達水平。
　　研究方法：
　　采用Scien Cell公司的骨髓間充質(zhì)干細胞，經(jīng)復蘇、培養(yǎng)、傳代后取得骨髓間充質(zhì)干細胞第三-第八代，采用agomir和antagomir對骨髓間充質(zhì)干細胞

4、進行轉(zhuǎn)染，于轉(zhuǎn)染后96小時進行油紅0染色、茜素紅染色、Ⅱ型膠原染色，觀察向成骨、成脂、成軟骨方向的分化能力;將轉(zhuǎn)染后的骨髓間充質(zhì)干細胞提取RNA后送檢基因芯片，篩選差異表達的基因。
　　研究結果：
　　1.復蘇、培養(yǎng)、傳代后得到骨髓間充質(zhì)干細胞P3-P8代;結合生物信息學，根據(jù)此前試驗的結果進一步篩選出對骨髓間充質(zhì)干細胞分化可能存在影響的8種miRNA;
　　2.結合agomir、antagomir轉(zhuǎn)染及油紅0、茜素紅

5、、Ⅱ型膠原染色結果，Hsa-miR-1303具備調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞分化的能力;
　　3.采用全基因組芯片檢測miRNA轉(zhuǎn)染前后的基因表達變化，從而得出hsa-mir-1303調(diào)控的靶基因:ANKH;
　　結論：
　　1.應用生物信息學方法篩選出的8種miRNA當中，has-mir-1303可以調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細胞分化。
　　2.應用全基因組芯片驗證出has-mir-1303的靶基因:ANKH;經(jīng)功能富集分析得出