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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
觀察大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在不同彈性的聚二甲基硅氧烷(Polydimethylsiloxane,PDMS)基底上的骨向分化差異,尋找合適的骨向分化基底硬度范圍,明確高彈性模量的基底是否適合BMSCs向成骨細(xì)胞分化,以期未來(lái)能夠通過(guò)調(diào)整骨替代材料的彈性,模擬適于骨向分化的理想條件,從而提高其成骨誘導(dǎo)能力,最終在體內(nèi)環(huán)境下達(dá)到
2、骨組織重建的最佳狀態(tài)。
方法:
本研究擬結(jié)合材料學(xué)、生物力學(xué)和分子生物學(xué)的理論和方法,進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。以PDMS制備彈性模量為2170±340KPa、354±40KPa、50±12KPa、14±1KPa、4±0.1KPa的基底,模擬生物體內(nèi)不同組織的彈性,培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,利用實(shí)時(shí)定量聚合鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR)、免疫印跡檢測(cè)(Western blot)、免疫熒光染色檢測(cè)(Immunofluore
3、scence)、堿性磷酸酶活性測(cè)定(Alkaline PhosphataseAssay)等方法,從細(xì)胞形態(tài)、成骨分化分子指標(biāo)蛋白檢測(cè)和細(xì)胞功能等方面來(lái)評(píng)估調(diào)控PDMS的基質(zhì)彈性對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞骨向分化影響。
結(jié)果:
PDMS能夠模擬生物體內(nèi)不同組織的彈性,彈性模量可從2170±340KPa到4±0.1KPa,經(jīng)過(guò)表面修飾后,大鼠BMSCs在其上貼壁良好,形態(tài)規(guī)則,培養(yǎng)7天后,不同彈性基底上的BMSCs表現(xiàn)出骨向分化
4、差異。
在彈性模量為2170±340KPa、354±40KPa、50±12KPa、14±1KPa、4±0.1KPa的PDMS基底上誘導(dǎo)培養(yǎng)7天后,大鼠BMSCs在彈性模量為354±40KPa的基底上表現(xiàn)出更顯著的骨向分化能力,與本組實(shí)驗(yàn)內(nèi)其他彈性模量的基底比較有顯著性差異。
結(jié)論:
PDMS可滿足彈性基底誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞骨向分化實(shí)驗(yàn)的要求,可作為良好的觀察其體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)基底材料。
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