大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的研究.pdf

1、目的：探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化的可能性。 方法：分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，分別采用對(duì)照組、神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)120μg/L組，嗅鞘細(xì)胞上清液組對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)分化。采用倒置相差顯微鏡連續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況及形態(tài)變化。采用免疫組化法檢測(cè)神經(jīng)前體細(xì)胞的特異性標(biāo)志神經(jīng)巢蛋白(Nestin)．神經(jīng)細(xì)胞的特異性標(biāo)志神經(jīng)元特異性烯醇化酶((neon-specific enolase，NSE)、神經(jīng)絲蛋白(B-tubulin

2、)的表達(dá)。 結(jié)果：一，原代細(xì)胞情況：24 h后大量細(xì)胞貼壁，呈寬大扁平的成纖維細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞核漿分界清楚，多為單核，隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，大部分細(xì)胞呈集落生長(zhǎng)，并迅速增殖，集落大小不一，集落中的細(xì)胞呈典型的梭形細(xì)胞，集落之間互相靠近，一周后可達(dá)到80％融合，呈漩渦狀排列。二，傳代細(xì)胞情況：細(xì)胞很快貼壁，并分布均勻，與原代細(xì)胞相比，細(xì)胞形態(tài)更為單一，呈典型梭形。三，神經(jīng)細(xì)胞特異性標(biāo)志測(cè)定：對(duì)照組僅見極少量的神經(jīng)前體細(xì)胞的特異性標(biāo)志神經(jīng)

3、巢蛋白表達(dá)陽(yáng)性，120μg/L神經(jīng)節(jié)苷脂溶液組、嗅鞘細(xì)胞上清液分別于誘導(dǎo)后2 h、6小時(shí)出現(xiàn)神經(jīng)巢蛋白Nestin表達(dá)陽(yáng)性，6-8 h、24h后神經(jīng)細(xì)胞的特異性標(biāo)志神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase，NSE)、神經(jīng)絲蛋白(β-tubulin)表達(dá)陽(yáng)性。在一定時(shí)間內(nèi)，上述指標(biāo)表達(dá)強(qiáng)度隨時(shí)間逐漸增加，在這個(gè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)nestin的表達(dá)要早于NSE和β-tubulin的表達(dá)，因?yàn)閚estin是神經(jīng)前體細(xì)胞的標(biāo)