體外誘導人骨髓間充質(zhì)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元分化.pdf

1、授予單位代碼學號或申請?zhí)柮芗夃嵵荽髮W碩士學位論文1045903341155論文題目：體外誘導人骨髓間充質(zhì)干細胞向多巴胺能神經(jīng)元分化作者姓名：柴立輝學科門類：醫(yī)學專業(yè)名稱：醫(yī)學免疫學導師姓名、職稱：曹孟德副教授陳宗德副教授2006年05月16日鄭州大學2006年顧十研究生畢業(yè)論文體外誘導人骨髓問充質(zhì)千自J胞向多巴胺能神經(jīng)兀分化性疾病具有重要的臨床意義。目前的研究尚沒有定向誘導人BMScs分化為功能性DA能神經(jīng)元的直接證據(jù)。本研究根據(jù)體外已

2、經(jīng)成功誘導神經(jīng)干細胞和胚胎干細胞分化為DA能神經(jīng)元的方法，通過在體外聯(lián)合應(yīng)用細胞營養(yǎng)因子和化學誘導劑誘導人BMscs向DA能神經(jīng)元進行分化，觀察分化后的細胞是否具有神經(jīng)元電鏡下的超微結(jié)構(gòu)，檢測其是否表達DA能神經(jīng)元分化過程中的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Nurrl、Ptx3和L_mxlb，以及是否具有分泌DA神經(jīng)遞質(zhì)的功能，探討體外誘導人BMsCs分化為DA能神經(jīng)元的方法和機制。方法：通過密度梯度離心法獲取正常成人骨髓中的單個核細胞，貼壁培養(yǎng)法純化BM

3、sCs，流式細胞儀(nowcytometer，F(xiàn)cM)檢測cD34、cD45、cDl4、CD33、CD44、CD49、CD90w、CDll7等細胞表面標志物在BMSCs上的表達。預(yù)先使用含20n咖LbFGF和20n咖LEGF的DMEML培養(yǎng)基培養(yǎng)擴增BMscs3d后，更換含有50肛M腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brainderivedneurotrophyfactor，BDNF)，10∥Mforskolin(FsK)和10肛M多巴胺(dopam

4、ien，DA)的DMEML誘導培養(yǎng)基繼續(xù)對BMsCs進行誘導培養(yǎng)2w。觀察誘導分化2w后的細胞在透射電子顯微鏡下神經(jīng)元的超微結(jié)構(gòu)特點；RT_PCR檢測DA能神經(jīng)元分化過程中的轉(zhuǎn)錄因子NuⅡ1、Ptx3、Lmxlb和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuronespccificenolase，NSE)及酪氨酸羥化酶(tyrosinehydroxylasc，TH)基因的表達：免疫細胞化學染色檢測NSE和TH蛋自在分化后不同階段細胞上的表達；高效液相色