間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及向神經(jīng)元的誘導(dǎo)分化.pdf

1、目的:間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)起源于中胚層,主要位于成體骨髓和人胎兒臍血,與造血干細(xì)胞共存.MSC不僅參與構(gòu)建造血微環(huán)境,發(fā)揮支持造血的作用;而且在動(dòng)物出生后仍然維持一定程度的自我更新能力,以及具有分化為多種類型細(xì)胞的潛力,屬于成體多能干細(xì)胞范疇.該實(shí)驗(yàn)分離及培養(yǎng)了人臍血和兔骨髓兩種來源的MSC,觀察細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇,以及貼壁、生長與擴(kuò)增規(guī)律,并使用MTT比色實(shí)驗(yàn)繪制不同狀態(tài)MSC的生長曲線.采用調(diào)整的Woodbury方案,即B-巰基乙醇

2、(BME)低劑量(≤3mM)、短時(shí)程(≤2h)誘導(dǎo)兔骨髓MSC向神經(jīng)元分化,并在誘導(dǎo)后繼續(xù)培養(yǎng),免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定誘導(dǎo)分化和分化后培養(yǎng)細(xì)胞的陽性率.嘗試使用膜片箝全細(xì)胞記錄的方法記錄誘導(dǎo)前后MSC的鉀離子電流的變化,以反映細(xì)胞的電生理功能狀態(tài).實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用"均數(shù)"或者"均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差"表示,樣本間比較采用方差分析,檢驗(yàn)水準(zhǔn)均為α=0.05.結(jié)論:1.兔骨髓MSC能夠建立穩(wěn)定的連續(xù)傳代的體外培養(yǎng),凍存后復(fù)蘇的細(xì)胞形態(tài)和特性不變.人臍血中含MSC