PHBV納米纖維對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的:探究靜電紡絲制備的聚羥基丁酸戊酸共聚酯（Poly-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate，PHBV）納米材料對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)粘附、增殖以及向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化的影響，為PHBV納米材料與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合移植治療脊髓損傷提供新的依據(jù)。
　　方法:取4周齡(100-120g)的SD大鼠，將股骨和脛骨分離出

2、，從中提取骨髓，采用貼壁分離培養(yǎng)的方法分離純化大鼠BMSCs，待細(xì)胞融合80％后1∶2分瓶傳代，傳至第3代時(shí)，細(xì)胞計(jì)數(shù)后，以2×104/ml接種至靜電紡絲制備的PHBV納米纖維膜（定向A-NF與非定向R-NF）上，以接種至玻片上為對(duì)照組，倒置顯微鏡下觀察對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)。用電鏡觀察細(xì)胞與PHBV納米纖維膜的粘附情況，于培養(yǎng)第1、4、7天時(shí)，使用細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒CCK-8檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況。待細(xì)胞與PHBV納米纖維膜融合后，以維甲酸(RA)

3、作為增殖及分化誘導(dǎo)因子，每孔加入200uL對(duì)BMSCs進(jìn)行增殖培養(yǎng)、分化誘導(dǎo)，倒置顯微鏡下觀察對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)的變化，于第2、4、6天將各組細(xì)胞采用4％多聚甲醛固定，封閉，用Nestin，MAP-2，GFAP抗體行化學(xué)染色鑒定神經(jīng)干細(xì)胞，神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的生成情況。
　　結(jié)果:BMSCs與PHBV納米纖維膜有很好的相容性，定向與非定向PHBV納米纖維膜均能很好的促進(jìn)細(xì)胞增殖，第1天，A-NF與R-NF表面細(xì)胞略多于玻片上的細(xì)

4、胞，A-NF與玻片上細(xì)胞無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，R-NF表面細(xì)胞與兩者皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，第4天及第7天時(shí)，A-NF與R-NF表面細(xì)胞顯著增長(zhǎng)，其中R-NF表面細(xì)胞增殖顯著高于A-NF表面，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且兩者與玻片細(xì)胞均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在A-NF表面的細(xì)胞沿纖維方向生長(zhǎng)，其形態(tài)被顯著拉長(zhǎng)。加入維甲酸(RA)誘導(dǎo)劑24h后，細(xì)胞形態(tài)開始變化，胞體開始回縮，突起逐漸伸出。免疫熒光染色示PH

5、BV纖維膜上的細(xì)胞在第2天即可檢測(cè)到Nestin陽性細(xì)胞的表達(dá)，第4天可檢測(cè)到MAP-2，GFAP陽性細(xì)胞表達(dá)，對(duì)照玻片組第4天開始表達(dá)Nestin抗體，第6天開始表達(dá)MAP-2，GFAP抗體。
　　結(jié)論:A-NF和R-NF均能很好的促進(jìn)細(xì)胞增殖，有良好的相容性，且R-NF表面細(xì)胞增殖顯著高于A-NF表面。定向納米纖維通過引導(dǎo)細(xì)胞骨架延伸從而對(duì)細(xì)胞形貌產(chǎn)生顯著影響，使著細(xì)胞沿著纖維方向定向生長(zhǎng)，這和神經(jīng)細(xì)胞軸突定向生長(zhǎng)相符合。PH