補陽還五湯誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)樣細胞分化.pdf

1、目的 探討補陽還五湯在MSCs向神經(jīng)細胞體外定向誘導(dǎo)分化過程中的作用，為MSCs在神經(jīng)內(nèi)科學領(lǐng)域的研究和應(yīng)用奠定實驗基礎(chǔ)。 方法 取成年健康SD大鼠股骨和脛骨骨髓，密度梯度離心法分離獲取骨髓單個核細胞(mononuclear cells，MNCs)。多次洗滌后，將細胞沉淀接種于含10％胎牛血清(FBS)的低糖DMEM(L-DMEM)培養(yǎng)液中，置于37℃、5％CO<,2>、飽和濕度的CO<,2>培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細胞融

2、合后用0.25％胰酶消化傳代。培養(yǎng)3～6代的細胞接種于塑料培養(yǎng)皿中，待細胞鋪滿80％培養(yǎng)皿時，采用堿性成纖維生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)培養(yǎng)24 h，以促進細胞的增殖。然后實驗組細胞應(yīng)用補陽還五湯對大鼠MSCs(rMSCs)進行體外定向誘導(dǎo)分化；對照組細胞不加任何誘導(dǎo)劑。應(yīng)用免疫細胞化學方法檢測誘導(dǎo)1h、3h后神經(jīng)干細胞標記物一巢蛋白(nestin)的表達，以及誘導(dǎo)5 h后神經(jīng)元標記

3、物一神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)和星形膠質(zhì)細胞標記物-膠質(zhì)細胞纖維酸性蛋白(glail fibrillary acidic protein，GFAP)的表達，分別計數(shù)各種分化細胞的陽性率。 結(jié)果 1. 分離后的大鼠骨髓MSCs(rMSCs)在體外培養(yǎng)條件下，呈增殖性生長。傳代后的rMSCs約3天左右可擴增一倍。 2.MSCs經(jīng)誘導(dǎo)1 h后，即有部分細胞呈現(xiàn)神經(jīng)元樣

4、形態(tài)，誘導(dǎo)5 h結(jié)束時，大部分細胞具有典型神經(jīng)元樣形態(tài)：較多的神經(jīng)元樣細胞聚集在一起，相鄰細胞間的軸突聯(lián)結(jié)成網(wǎng)狀。 3. 對照組MSCs僅表達少量nestin和NSE，陽性率分別為1.6％±0.8％和5.8％±2.6％。實驗組MSCs誘導(dǎo)1h、3h后nestin陽性率分別為40.5％±2.3％和29.0％±3.4％，nestin的表達呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(P<0.05)；實驗組誘導(dǎo)5h后NSE的陽性率為86.8％±2.7％，與