共培養(yǎng)法誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向毛細(xì)胞樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:建立體外共培養(yǎng)法定向誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）向毛細(xì)胞樣細(xì)胞分化的方法。
　　 方法：采用全骨髓貼壁法分離培養(yǎng)小鼠骨髓中的間充質(zhì)干細(xì)胞。并傳代和純化。第三代用熒光免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)志蛋白CD44、CD34、CD106、Vimentin的表達(dá)。采新生小鼠腦膠質(zhì)細(xì)胞 (ASTs) 體外培育到第三代，用熒光免疫組化法檢測(cè)膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)標(biāo)志蛋白GFAP的表達(dá)。采新生小鼠耳基底膜細(xì)胞（BAMCs）體外擴(kuò)增培育至第三代備用

2、。取第三代的BMSCs與ASTs共培養(yǎng)，并聯(lián)合RA （DMEM/F12/RA+10％FBS）誘導(dǎo)培養(yǎng)7天,使BMSCs向神經(jīng)前體細(xì)胞分化。誘導(dǎo)后的細(xì)胞用熒光免疫組化法檢測(cè)神經(jīng)前體標(biāo)志蛋白(Nestin)的表達(dá)情況。誘導(dǎo)后所得的細(xì)胞再與BAMCs共培養(yǎng)于DMEM/F12+10％FBS中14天,誘導(dǎo)其向毛細(xì)胞樣細(xì)胞分化。并用熒光免疫組化法檢測(cè)聽毛細(xì)胞標(biāo)記物（Math1和MyosinVIIa）蛋白的表達(dá)。采用RT-PCR法檢測(cè)Math1和My

3、osinVIIa mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:經(jīng)ASTs共培養(yǎng)并聯(lián)合RA誘導(dǎo)后的BMSCs表達(dá)神經(jīng)前體細(xì)胞特異性蛋白Nestin。此種神經(jīng)前體細(xì)胞與BAMCs共培養(yǎng)后，部份細(xì)胞表達(dá)毛細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白Math1、MyosinVIIa mRNA和蛋白。
　　 結(jié)論：BMSCs經(jīng)與ASTs共培養(yǎng)并聯(lián)合RA誘導(dǎo)后，所得細(xì)胞再與BAMCs共培養(yǎng)，能誘導(dǎo)分化出部份表達(dá)Math1和MyosinVIIa mRNA和蛋白的毛細(xì)胞樣細(xì)胞