體外誘導人羊膜間充質(zhì)干細胞向韌帶細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的：探討人羊膜間充質(zhì)干細胞（human amniotic mesenchymal stem cells， hAMSCs）是否具有MSCs的特性及經(jīng)誘導后在體外能否向韌帶細胞分化。
　　方法：取產(chǎn)婦胎盤通過酶消化法獲得 hAMSCs，流式細胞術(shù)鑒定 hAMSCs表型特征。取第3代hAMSCs分別加入含不同誘導液的LG-DMEM/F12培養(yǎng)基：A組TGF-β1＋bFGF，B組透明質(zhì)酸（hyaluronan，HA），C組 TGF-β1

2、＋bFGF＋HA， D組為空白對照組。倒置顯微鏡觀察誘導后21 d各組細胞形態(tài)學變化；磺酰羅丹明B（sulforhodamine B，SRB）比色法檢測各組細胞生長活性；誘導后7、14、21 d分別采用免疫組織化學染色及實時熒光定量 PCR檢測韌帶特異性蛋白和基因表達。
　　結(jié)果：流式細胞術(shù)鑒定結(jié)果表明 hAMSCs表達 MSCs表型。倒置相差顯微鏡觀察示誘導21 d A、B、C組細胞均呈長梭形纖維細胞樣生長，C組細胞形態(tài)更單一、

3、有明顯方向性且較 A組排列更緊湊。SRB比色法檢測示各組細胞于培養(yǎng)6 d左右達增殖高峰，6d時 A、B、C組細胞活性均顯著高于 D組。免疫組織化學結(jié)果示：誘導培養(yǎng)7 d，各組均未檢測到 TNC表達；7、14、21 d A、B、C組Ⅰ型膠原表達均顯著高于D組，14、21 d A、B、C組Ⅲ型膠原表達顯著高于 D組，差異均有統(tǒng)計學意義（ P<0.001）。 B組Ⅰ型膠原表達以及 A、C組Ⅲ型膠原、TNC表達隨時間增加均呈逐漸增高趨勢，各時間

4、點間比較差異均有統(tǒng)計學意義（ P<0.001）。實時熒光定量 PCR結(jié)果示：誘導培養(yǎng)21 d， C組Ⅰ型膠原、TNC mRNA相對表達量顯著高于 A、B組，B組Ⅲ型膠原 mRNA相對表達量顯著高于 A、C組，差異均有統(tǒng)計學意義（ P<0.05）。A、C組Ⅰ型膠原、TNC以及C組Ⅲ型膠原 mRNA相對表達量隨時間增加呈逐漸上調(diào)趨勢，各時間點間比較差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.001）。
　　結(jié)論：hAMSCs具有MSCs的特性，有良好