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文檔簡介
1、研究目的
探討分離、提純和擴(kuò)增孕中期羊水來源間充質(zhì)干細(xì)胞(AF-MSCs)的方法,以及體外誘導(dǎo)AF-MSCs向軟骨細(xì)胞分化的可能性。
研究方法
機(jī)械手段挑取孕中期人羊水細(xì)胞培養(yǎng)體系中的MSCs集落,培養(yǎng)擴(kuò)增后,通過流式細(xì)胞術(shù)對表面抗原表達(dá)情況進(jìn)行鑒定,并通過RT-PCR檢測多能性基因Oct4及Nanog的表達(dá)情況。取第3代AF-MSCs,經(jīng)TGF-β1、IGF-1、地塞米松等生長因子向軟骨細(xì)胞方
2、向誘導(dǎo)分化。倒置相差顯微鏡觀察誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)的變化。誘導(dǎo)3周后,免疫熒光染色及RT-PCR,分別檢測軟骨特異性基質(zhì)CollengonⅡ、Aggrecan、Chondromudulin-1、S100的蛋白及其基因的表達(dá)情況。
研究結(jié)果
機(jī)械手段分離出的AF-MSCs為CD105、CDl66陽性,CD29若陽性,CD34、CD45陰性,符合MSCs特點(diǎn)。AF-MSCs表達(dá)多能性基因Oct4,但不表達(dá)Nanog。誘
3、導(dǎo)2周后,細(xì)胞開始呈多角形樣改變;誘導(dǎo)后3周時(shí),大部分細(xì)胞由長梭形轉(zhuǎn)變?yōu)槎嘟切?。免疫熒光及RT-PCR檢測顯示誘導(dǎo)后的AF-MSCs軟骨特異性基質(zhì)CollengonⅡ、Aggrecan、Chondromudulin-1和S100的蛋白和基因呈陽性表達(dá),而未經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)的AF-MSCs呈陰性表達(dá)。
研究結(jié)論
機(jī)械分離法可有效獲得孕中期羊水來源間充質(zhì)干細(xì)胞,經(jīng)TGF-β1,IGF-1,地塞米松聯(lián)合誘導(dǎo)3周后,AF-
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