脂肪間充質(zhì)干細胞向軟骨細胞誘導分化的實驗研究.pdf

1、[目的]：研究人脂肪干細胞(humanAdipose-derivedStemCells，ADSCs)在體外單層培養(yǎng)條件下誘導為軟骨細胞可行性；研究脂肪干細胞與脫鈣骨復合物在三維誘導培養(yǎng)條件下，回植到裸鼠皮下環(huán)境中組織形成情況，為軟骨組織工程臨床應用提供初步實驗和理論依據(jù)。 [材料與方法]:對脂肪抽吸物中分離的間質(zhì)細胞進行體外培養(yǎng)誘導。實驗在兩種條件下進行，單層誘導培養(yǎng)和三維誘導培養(yǎng)(支架為脫鈣骨)，每種實驗條件各設誘導組和未誘導

2、組，誘導組用含有TGF-β1、地塞米松等特定誘導培養(yǎng)液進行誘導培養(yǎng)，對照組的培養(yǎng)液為含10﹪FBS的DMEM。每天光鏡下觀察單層誘導和未誘導的脂肪干細胞形態(tài)學的改變，培養(yǎng)三天后免疫組化、原位雜交和RT-PCR等方法檢測膠原和蛋白多糖的體外表達情況；脂肪干細胞－脫鈣骨復合物誘導實驗組和未誘導對照組體外培養(yǎng)6天，回植到裸鼠皮下，分別于2、4、6、8、10周取材。石蠟切片免疫組化、Masson's、Alician's染色進行膠原和蛋白多糖表達

3、、分布鑒定。 [結果]:未誘導的脂肪干細胞呈克隆性生長，細胞形態(tài)呈長梭形；誘導后細胞逐漸呈三角形、多角形等軟骨細胞樣形態(tài)。免疫組化、原位雜交顯示誘導后ADSCs表達Ⅱ型膠原，但同時也觀察到Ⅰ、Ⅲ型膠原表達；RT-PCR證實誘導ADSCs表達aggrecan、Ⅱ型膠原mRNA，同時表達Ⅰ、Ⅲ、Ⅹ、Ⅺ型膠原mRNA，未見Ⅸ型膠原mRNA表達；未誘導ADSCs不表達aggrecan、Ⅱ型膠原mRNA。三維誘導后回植皮下2、4、6、8、

4、10周取材、切片，實驗組免疫組化顯示表達Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型膠原；Masson's、Alician's染色可見材料內(nèi)的膠原分泌旺盛，有酸-1-性粘多糖沉積，但組織學觀察特征性的軟骨組織結構形成不明顯；對照組未見Ⅱ型膠原及酸性粘≥糖沉積。 [結論]:脂肪干細胞單層誘導培養(yǎng)條件下，能分泌軟骨細胞特征性細胞外基質(zhì)-Ⅱ型膠原、aggrecan等，脂肪干細胞可作為軟骨組織工程種子細胞的重要來源；誘導后回植的細胞－脫鈣骨復合物可表達特異的軟骨基質(zhì)－