骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞增殖分化的機(jī)制探討.pdf

1、目的和意義: 腦缺血是嚴(yán)重威脅人們生命健康的常見多發(fā)病，干細(xì)胞移植為腦缺血的臨床治療帶來了新的曙光。研究表明：腦缺血后移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)可通過促進(jìn)缺血區(qū)新生血管的生成和內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)的增殖達(dá)到改善神經(jīng)功能缺損的目的，但MSCs促進(jìn)內(nèi)源性NSCs的增殖分化機(jī)制尚不清楚。本研究通過觀察MSCs對NSCs增殖分化起重要作用的notch信號通路的影響及MSCs中內(nèi)皮細(xì)胞(ECs)可能起的作用，以進(jìn)一步探討M

2、SCs調(diào)控NSCs增殖分化的機(jī)制，為MSCs移植治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病奠定理論基礎(chǔ)。 研究內(nèi)容和方法： 1.神經(jīng)球懸浮法培養(yǎng)小鼠NSCs，免疫細(xì)胞染色法檢測神經(jīng)巢蛋白(nestin)的表達(dá)以鑒定NSCs。 2.貼壁篩選法分離小鼠MSCs，常規(guī)方法進(jìn)行傳代培養(yǎng)，免疫細(xì)胞染色法檢測CD29、CD34進(jìn)行MSCs鑒定。 3.采用transwell板將MSCs與NSCs進(jìn)行共培養(yǎng)，同時(shí)設(shè)ECs功能阻斷的M

3、SCs與NSCs共培養(yǎng)組、微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMVECs)及成纖維細(xì)胞(3T3)與NSCs共培養(yǎng)進(jìn)行對照。 4.采用RT-PCR方法觀察各培養(yǎng)組不同時(shí)間段notch信號通路相關(guān)基因notch1、hes1、mash1以及NSCs增殖分化相關(guān)基因：nestin基因和神經(jīng)膠質(zhì)酸性蛋白(GFAP)基因的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1.成球懸浮法培養(yǎng)的小鼠NSCs增殖旺盛，nestin呈陽性表達(dá)。 2.MSCs增殖旺盛，細(xì)胞

4、化學(xué)染色結(jié)果顯示CD29(+)，CD34(-)，符合MSCs特征。 3.各共培養(yǎng)組notch信號通路相關(guān)基因及NSCs增殖分化相關(guān)基因的變化： (1)MSCs及HMVECs均可促進(jìn)NSCs的notch1及hes1基因表達(dá)，且6h達(dá)高峰；而ECs功能阻斷后的MSCs與HMVECs對NSCs的notch1及hes1基因表達(dá)影響較小，6h基因表達(dá)量顯著低于MSCs組及HMVECs組，說明ECs在激活notch1及hes1基因表

5、達(dá)過程中起了主要作用。 (2)MSCs及HMVECs對NSCs的mash1基因表達(dá)影響是24h內(nèi)呈下調(diào)趨勢，而ECs功能阻斷劑的MSCs和HMVECs以及3T3組的變化則呈上調(diào)趨勢。說明ECs能抑制與notch通路激活呈負(fù)調(diào)節(jié)關(guān)系的mash1基因表達(dá)。 (3)MSCs及HMVECs對NSCs的nestin基因及GFAP基因的表達(dá)影響較為一致，nestin基因及GFAP基因表達(dá)無明顯變化；而ECs功能阻斷后的MSCs和HM