恒河猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的定向分化及其機(jī)制.pdf

1、肌腱損傷是外科臨床的常見(jiàn)疾病,目前尚未有理想的治療方法.肌腱組織工程研究為臨床修復(fù)肌腱損傷和缺損提供了新思路.該研究通過(guò)貼壁篩選法結(jié)合MSCs專(zhuān)用培養(yǎng)基MSCGM從非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物恒河猴骨髓中分離、培養(yǎng)骨髓MSCs,建立體外培養(yǎng)擴(kuò)增骨髓MSCs的方法;應(yīng)用免疫組織化學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)等手段檢測(cè)所分離細(xì)胞的堿性磷酸酶活性、細(xì)胞表面抗原標(biāo)志、細(xì)胞基質(zhì)蛋白屬性;采用排除法對(duì)所離的細(xì)胞進(jìn)行鑒定,并將所分離細(xì)胞接種于裸鼠體內(nèi)觀察其多向分化潛能;應(yīng)用原位

2、雜交法檢測(cè)MSCs的端粒酶活性;通過(guò)基因轉(zhuǎn)染方法將外源基因BMP12導(dǎo)入骨髓MSCs中,誘導(dǎo)骨髓MSCs定向分化為腱細(xì)胞;通過(guò)Western Blotting檢測(cè)BMP12基因?qū)牒蟮腗SCs內(nèi)信號(hào)蛋白分子Smad4的表達(dá)變化,初步探討骨髓MSCs定向分化為腱細(xì)胞的機(jī)制.結(jié)果表明,該研究成功地建立了體外培養(yǎng)擴(kuò)增骨髓MSCs的簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、高效的方法.MSCs的細(xì)胞周期和生長(zhǎng)曲線(xiàn)提示所分離的MSCs具有較強(qiáng)的增殖潛能;免疫組織化學(xué)和流式細(xì)胞

3、術(shù)檢測(cè)證實(shí)了所分離的細(xì)胞為未分化的骨髓MSCs,而且細(xì)胞的均一性較好,純度較高;原位雜交法證實(shí)了MSCs具有較高的端粒酶活性;裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明所分離的MSCs具有多向分化的能力;通過(guò)基因轉(zhuǎn)染的方法將外源基因BMP12導(dǎo)入骨髓MSCs中,成功地誘導(dǎo)了骨髓MSCs定向分化為腱細(xì)胞;通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示,誘導(dǎo)后的細(xì)胞表型發(fā)生明顯改變,具有與腱細(xì)胞相似的表型特征,而且誘導(dǎo)后的細(xì)胞仍保持較強(qiáng)的增殖能力;Western