直接接觸共培養(yǎng)誘導骨髓間充質(zhì)干細胞定向分化的研究.pdf

1、目的:應(yīng)用 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells，BM-MSC)與乳鼠心肌細胞(cardiomyocytes， CMs)在體外直接接觸共培養(yǎng)的方法，研究BM-MSC向CMs的分化情況及心肌樣細胞特異性標記物的表達。
　　方法:取四周齡SD大鼠，分離、培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，用流式細胞儀鑒定 BM-MSC表面抗原CD29、CD45、

2、CD44、CD90、 CD11b，用細胞誘導劑誘導 BM-MSC向成骨、成軟骨、成脂方向分化。取出生1-2天乳鼠，分離培養(yǎng)心肌細胞，用免疫熒光法鑒定心肌細胞標志物cTnT、cTnI、α-actin。用DAPI標記 BM-MSC，與乳鼠心肌細胞直接接觸共培養(yǎng)分化為心肌樣細胞，檢測心肌特異性蛋白的表達。
　　結(jié)果:原代 SD大鼠 BM-MSC體外培養(yǎng)的形態(tài)學特點：原代BMMSCs形態(tài)多樣，以紡錘形、圓形、短梭形以及多角形等最為多見，細

3、胞有聚集生長的趨向，多個細胞形成一個集落。細胞傳代后體積變大，形態(tài)較均一，以成纖維細胞樣多見，長梭形，細胞均一度較高，碎片或雜細胞數(shù)目也減少。分析細胞周期結(jié)果顯示 BM-MSC約15％處于活躍的復制期，其余絕大部分細胞停滯在 G0/G1（84.9%）,即說明大部分細胞具有高度分化的潛能。采用流式細胞儀檢測BM-MSC表面特異性抗原 CD44、CD29、CD90表達陽性，表面抗原CD45、CD11b表達陰性。直接接觸共培養(yǎng)的 BM-MSC