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1、 目的:用全骨髓法和密度梯度離心兩種方法對兔骨髓間質(zhì)干細胞(MSCs)進行體外分離、培養(yǎng)及擴增,對比在培養(yǎng)基中只加入TGF-β1一種誘導(dǎo)物質(zhì)情況下,兩種方法得到的MSCs的成軟骨能力及差別。 方法:用3﹪戊巴比妥鈉1mg/kg耳緣靜脈麻醉,無菌條件下用骨穿針從兩側(cè)股骨大轉(zhuǎn)子處穿入股骨髓腔內(nèi),骨穿針接10ml注射器,每側(cè)各抽取骨髓3~4ml,混合后等分為兩份,一份(A組全骨髓法)中直接加入DMEM-LG培養(yǎng)液,用全骨髓法培養(yǎng)
2、細胞,另一份(B組密度梯度離心法)加入裝有Percoll分離液的無菌離心管中,1000r/min離心10min,吸取液面交界處云霧狀單核細胞層細胞,制成單細胞懸液。 結(jié)論:1.密度梯度離心法可以在原代即獲得較純的細胞,但原代細胞生長比較緩慢;全骨髓法雖然只能在傳代后得到較純的細胞,但原代細胞的倍增速度明顯優(yōu)于前者; 2.生長曲線顯示,兩種方法分離方法得到的BMSCs生長良好,并且第3代的生長曲線表明二者的增長速率沒有差別;
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