Ⅰ型膠原蛋白對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討體外條件下分離、純化兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的有效方法，對(duì)所獲細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的生物學(xué)特性。以及觀察Ⅰ型膠原蛋白對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化的作用。 方法：實(shí)驗(yàn)于青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院骨科研究所進(jìn)行。首先采用密度梯度離心法分離兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，用貼壁培養(yǎng)法對(duì)所獲細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)、傳代、純化和擴(kuò)增，觀察細(xì)胞的生物學(xué)特性，倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征，透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表面標(biāo)志

2、物；將分離純化的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)于Ⅰ型膠原蛋白上面，對(duì)細(xì)胞的堿性磷酸酶表達(dá)、細(xì)胞礦化形成鈣化結(jié)節(jié)的能力進(jìn)行測(cè)定。 結(jié)果：分離的細(xì)胞1天后完全貼壁，貼壁的細(xì)胞平均10d后形成細(xì)胞克隆，所獲細(xì)胞形態(tài)均一，呈成纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)，細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物。在Ⅰ型膠原蛋白上面培養(yǎng)后，細(xì)胞堿性磷酸酶顯著表達(dá)，Von. Kossa染色可見礦化結(jié)節(jié)形成。 結(jié)論：密度梯度離心法分離，貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)所得細(xì)胞，可以有效分離、