激素誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨及成脂分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、臨床上非創(chuàng)傷性股骨頭壞死(Osteonecrosisofthefemoralhead，ONFH)多見(jiàn)，致殘率高。其中，腎上腺糖皮質(zhì)激素[簡(jiǎn)稱(chēng)激素]引發(fā)的ONFH己占第一位，臨床組織學(xué)及病理學(xué)研究證明：激素性O(shè)NFH的早期病理變化是股骨頭骨髓內(nèi)造血組織減少，脂肪組織增多，骨小梁內(nèi)骨細(xì)胞數(shù)目減少。 已有實(shí)驗(yàn)證明激素能夠誘導(dǎo)動(dòng)物骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向脂肪細(xì)胞分化，并引起脂質(zhì)代謝異常，繼而發(fā)生股骨頭壞死。這種現(xiàn)象與激素性O(shè)NFH的病理變化相

2、似，提示激素性O(shè)NFH可能與激素直接誘導(dǎo)BMSCs分化成脂肪細(xì)胞有關(guān)。以上結(jié)論都是通過(guò)體外培養(yǎng)動(dòng)物BMSCs得出上述結(jié)論，由于人和動(dòng)物間種屬的區(qū)別，通過(guò)人的BMSCs體外分離培養(yǎng)來(lái)研究激素性O(shè)NFH發(fā)病機(jī)制的文獻(xiàn)尚未見(jiàn)到報(bào)道。 我們?cè)诜蛛x獲取原代人的BMSCs的基礎(chǔ)上，傳代后加入地塞米松進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用分子生物學(xué)檢測(cè)方法，觀察地塞米松對(duì)hBMSCs的影響，深入探討激素性O(shè)NFH的發(fā)病機(jī)制。 材料和方法骨髓細(xì)胞來(lái)自鄭州大

3、學(xué)一附院臨床自愿提供者。在髂前上棘處取髂骨骨髓，通過(guò)密度梯度離心，貼壁分離培養(yǎng)，對(duì)原代的hBMSCs進(jìn)行傳代后，隨機(jī)分為兩組，加入濃度為10-7M的地塞米松的作為實(shí)驗(yàn)組，并以不加地塞米松的作為對(duì)照組，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞5天。采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)技術(shù)，檢測(cè)細(xì)胞中成脂轉(zhuǎn)錄因子(adipogenictranscriptionfactor)PPARγmRNA和骨鈣素(Osteocalcin)mRNA的表達(dá)。 結(jié)果1.通過(guò)密

4、度梯度離心，貼壁分離培養(yǎng)，本實(shí)驗(yàn)在體外培養(yǎng)得到hBMSCS，經(jīng)傳代后得到第2代hBMSCS。 2.用10-7M濃度的地塞米松處理細(xì)胞后5天，通過(guò)凝膠成像掃描系統(tǒng)作PCR半定量分析，顯示實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中PPARγmRNA呈高表達(dá)，而對(duì)照組中PPARγmRNA呈低表達(dá)，兩組間差異有顯著性(P＜0.05)。實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中OsteocalcinmRNA呈低表達(dá)，而對(duì)照組中OsteocalcinmRNA呈高表達(dá)，兩組間差異有高度顯著性(P＜0.