不同濃度慶大霉素對兔骨髓間充質(zhì)干細胞體外軟骨形成能力影響的研究.pdf

1、目的:本文研究兔骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow stem cells，BMSCs)在體外分離培養(yǎng)、誘導分化為成軟骨的能力，并初步觀察不同濃度（0μg/m、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml）慶大霉素對其增殖、分化成軟骨的影響。
　　 方法:無菌條件下，從8周齡家兔取下一側(cè)股骨及脛腓骨，通過全血培養(yǎng)法分離骨髓間充質(zhì)干細胞，接種于含有胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)傳代。每日以倒置顯微鏡觀察細

2、胞形態(tài)及生長情況。取第三代骨髓間充質(zhì)干細胞分五組，包含一個對照組（培養(yǎng)液為兔骨髓間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基: DMEM、10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，不含慶大霉素）和四個含慶大霉素濃度組（分別是10μg/ml、50μ g/ml、100μg/ml、200μg/ml加兔骨髓間充質(zhì)干細胞完全培養(yǎng)基）。采用MTT比色法進行增殖活性比較，Ⅱ型膠原免疫細胞化學染色和細胞甲苯胺藍染色檢測成軟骨分化情況。
　　 結(jié)果

3、:1.體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細胞呈扁平的梭形成纖維樣細胞生長，且細胞形態(tài)均一，傳代穩(wěn)定。2.MTT實驗顯示慶大霉素在100μg/ml、200μg/ml抑制細胞增殖，其余各濃度組對細胞增殖無明顯影響3.誘導后細胞甲苯胺藍染色顯示100μg/ml組及200μg/ml組細胞細胞染色較淺，大部分細胞失染，余各組陽性表達:Ⅱ型膠原免疫組織化學染色顯示100μg/ml組及200μg/ml組細胞弱陽性表達，余各組陽性表達。
　　 結(jié)論:1兔骨