兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)、鑒定的研究.pdf

1、目的：探討體外培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stemcells．MSCs)的方法，為進(jìn)一步的實驗研究打下基礎(chǔ)。 方法：選擇健康家兔，于脛骨行骨髓穿刺，提取動物骨髓，采用密度梯度離心法分離提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，通過貼壁培養(yǎng)篩選、純化獲得的MSCs，傳代培養(yǎng)，對第2、3、4、5、6代MSCs應(yīng)用MTT法測定生長曲線，分析MSCs的生長規(guī)律，對MSCs進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，通過流式細(xì)胞儀，對CD34、CD45、CD105三

2、種表面抗原進(jìn)行鑒定，證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為MSCs。 結(jié)果：原代培養(yǎng)的MSCs接種12小時后開始貼壁生長，形態(tài)為均勻成梭形，生長增殖迅速，符合MSCs生長的特性，7-10天MSCs融合接近80﹪，傳代培養(yǎng)生長良好。MSCs生長曲線呈S型，由生長曲線分析可知，MSCs在培養(yǎng)第3-7天為高速生長期，MSCs在第3-5代生長最為旺盛，并且培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定，CD34(-)、CD45(-)、CD105(+)，證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為較純的