增強(qiáng)樹突狀細(xì)胞向淋巴結(jié)遷移能力對(duì)乳腺癌DC疫苗免疫治療作用的影響.pdf

1、在腫瘤免疫過(guò)程中，T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答起著主導(dǎo)作用，DCs是目前功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(APC)，能刺激初始T淋巴細(xì)胞增殖，激發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答。由此，以DCs為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療越來(lái)越受到重視，并有較深入的研究。DCs攝取腫瘤抗原后從腫瘤部位到淋巴組織的遷移是有效激發(fā)抗腫瘤免疫反應(yīng)關(guān)鍵步驟。本研究嘗試通過(guò)使負(fù)載乳腺癌抗原DCs表面的CCR7表達(dá)上調(diào)或?qū)ε潴w的敏感性增強(qiáng)，以期在DCs注入體內(nèi)后，能有效遷移到達(dá)淋巴組織，充分發(fā)揮乳腺癌DC

2、s疫苗的免疫治療作用。 1、增強(qiáng)負(fù)載乳腺癌抗原小鼠骨髓來(lái)源樹突狀細(xì)胞(BMDCs)遷移能力的體外實(shí)驗(yàn)研究 [目的]上調(diào)體外培養(yǎng)乳腺癌抗原負(fù)載的BMDCs表面CCR7表達(dá)，觀察對(duì)其遷移能力和功能的影響。 [材料與方法]在體外以rmGM-CSF和rmIL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)BALB/c小鼠BMDCs，負(fù)載乳腺癌抗原后，加入不同的刺激物培養(yǎng)，觀察CCR7表達(dá)情況，并檢測(cè)表型及其功能的變化。 [結(jié)果]PGE2和LTC4組

3、BMDCs與DC對(duì)照組相比，CD86、CD80、CCR7陽(yáng)性細(xì)胞百分率升高，而且CCR7mRNA和蛋白表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)，對(duì)CCL19或CCL21趨化遷移能力增強(qiáng)(P＜0.05)；Bryo-1組BMDCs與對(duì)照組相比，CD86、CD80表達(dá)水平上調(diào)，CCR7mRNA表達(dá)增強(qiáng)(P＜0.05)，但在CCR7蛋白表達(dá)和細(xì)胞遷移能力中未顯示出優(yōu)勢(shì)(P＞0.05)。經(jīng)PGE2、LTC4及Bryo-1培養(yǎng)的BMDCs與對(duì)照組相比，對(duì)淋巴細(xì)胞的

4、增殖能力無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；激活的CTL細(xì)胞特異性殺傷活性不受影響，隨效靶比的增大，其殺傷乳腺癌細(xì)胞活性隨之增加。 [結(jié)論]PGE2和LTC4可以促進(jìn)BMDCs成熟，并通過(guò)CCR7mRNA和蛋白表達(dá)上調(diào)，增強(qiáng)其趨化遷移能力；而Bryo-1僅能促進(jìn)BMDCs成熟。 2、體外培養(yǎng)小鼠骨髓來(lái)源樹突狀細(xì)胞體內(nèi)抗乳腺癌免疫治療作用的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究 [目的]觀察上調(diào)體外培養(yǎng)乳腺癌抗原負(fù)載的BMDCs表面CCR7表達(dá)，在小鼠體內(nèi)對(duì)乳腺

5、癌免疫治療作用的影響。 [材料與方法]構(gòu)建BALB/c小鼠乳腺癌動(dòng)物模型，用體外誘導(dǎo)培養(yǎng)并負(fù)載乳腺癌抗原的各組BMDCs，接種治療，1×106個(gè)/只/周，連續(xù)4周，每周測(cè)量腫瘤大小。 [結(jié)果]根據(jù)腫瘤每周的平均體積變化情況，BMDCs治療各組腫瘤生長(zhǎng)速度均比PBS對(duì)照組慢，經(jīng)PGE2和LTC4培養(yǎng)DC組抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用高于DC組(P＜0.05)，而Bryo-1組的抑制作用與DC組相似(P＞0.05)。第8周種植腫瘤的重

6、量5組也有差異(P＜0.05)，PGE2和LTC4組平均腫瘤重量低于DC組(P＜0.05)。 [結(jié)論]以PGE2或LTC4培養(yǎng)BMDCs可以提高乳腺癌DCs疫苗的功效，更好發(fā)揮免疫功能，作用機(jī)制可能是促進(jìn)BMDCs表面CCR7表達(dá)，使其在體內(nèi)遷移能力增強(qiáng)。 3、調(diào)控負(fù)載乳腺癌抗原人外周血單核細(xì)胞來(lái)源DCs(MoDCs)的遷移能力[目的]體外培養(yǎng)乳腺癌抗原負(fù)載的人MoDCs，使其表面CCR7表達(dá)上調(diào)，觀察其在體外遷移能力。

7、 [材料與方法]用rhGM-CSF和rhIL-4培養(yǎng)MoDCs，負(fù)載乳腺癌抗原后，分別加入PGE2、LTC4或Bryo-1培養(yǎng)，檢測(cè)其表型及其功能變化。 [結(jié)果]體外實(shí)驗(yàn)顯示，3組不同培養(yǎng)條件，不影響MoDCs的刺激淋巴細(xì)胞增殖能力和自體特異性淋巴細(xì)胞殺傷活性。與對(duì)照組MoDCs相比，PGE2和LTC4組CD86表達(dá)增高，可以上調(diào)CCR7mRNA和蛋白表達(dá)(P＜0.05)。體外趨化試驗(yàn)顯示，PGE2可以使MoDCs對(duì)其配