乳腺癌腑下淋巴結(jié)來(lái)源的DC對(duì)特異性CTL體外殺傷活性的影響.pdf

1、目的：樹突狀細(xì)胞(DC)作為唯一的專職抗原遞呈細(xì)胞(APC)，處于免疫反應(yīng)的中心地位。非成熟的DC捕獲抗原后被激活為成熟的DC，其分子表面表達(dá)MI-IC-Ⅰ類分子、MHC-Ⅱ類分子、共刺激分子B<,7>-1(CD80)及B<,7>-2(CD86)、黏附分子CD54(ICAM-1)及CD50(ICAM-3)等，并將抗原肽遞呈給CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞，誘導(dǎo)其成為特異性細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞(CTL)，誘導(dǎo)CD4<'+>T細(xì)胞分泌細(xì)

2、胞因子，產(chǎn)生Th1型免疫應(yīng)答而發(fā)揮抗腫瘤作用。本實(shí)驗(yàn)從乳腺癌患者腋窩引流淋巴結(jié)中分離單個(gè)核細(xì)胞，用細(xì)胞因子rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α誘導(dǎo)成為DC，再以自體乳腺癌細(xì)胞凍融抗原負(fù)載DC，刺激從腋下引流淋巴結(jié)中分離、并以rhlL-2誘導(dǎo)培養(yǎng)的腫瘤區(qū)域引流淋巴結(jié)細(xì)胞(TDLNC)，使之成為具有針對(duì)靶細(xì)胞特異殺傷活性的CTL，并檢測(cè)其在體外針對(duì)自體乳腺癌細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞的殺傷效應(yīng)，分析分化誘導(dǎo)的DC的功能和CTL的殺傷特異性，

3、以期建立一種乳腺癌個(gè)體化的治療方法。 方法： 1．嚴(yán)格無(wú)菌摘取淋巴結(jié) 1-2 枚，用機(jī)械法獲取淋巴細(xì)胞懸液，并用淋巴細(xì)胞分離液分離出其中間白膜層單個(gè)核細(xì)胞，以含有10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基重懸、培養(yǎng)。 2．貼壁 2h，貼壁細(xì)胞以 rhGM-CSF(1000u/ml)，rhIL-4(200u/ml)和THF-α(200u/ml)聯(lián)合培養(yǎng)誘導(dǎo)DC；非貼壁細(xì)胞，加入rhIL-2(200u/ml)培養(yǎng)為

4、TDLNC。 3.用酶消化法自乳腺癌組織塊中制備自體乳腺癌細(xì)胞，并用自體乳腺癌細(xì)胞凍融抗原負(fù)載DC，后者和TDLNC共培養(yǎng)，以誘導(dǎo)抗原特異性CTL。 4.分別于第1天和第7天收獲DC，加入 PE-CD1a、PE-CD83、FITC-CD86單克隆抗體，用流式細(xì)胞分析儀檢測(cè)細(xì)胞表型。于第7天和第10天收獲TDLMC，分別加入FITC-CD3單克隆抗體，F(xiàn)ITC-CD4/PE-CD8二聯(lián)抗體，檢測(cè)其細(xì)胞表型。 5

5、.用非放射性細(xì)胞毒分析試劑盒，測(cè)定各組不同方法誘導(dǎo)的CTL細(xì)胞對(duì)自體乳腺癌細(xì)胞和MCF-7細(xì)胞的殺傷活性，從而分析分化誘導(dǎo)的DC的功能和 CTL 的殺傷特異性。 結(jié)論： 1.乳腺癌忠者腋下引流淋巴結(jié)中的單個(gè)核細(xì)胞，在rhGM-CSF、rhIL-4刺激活化和自體乳腺癌細(xì)胞凍融抗原及TNF-α的誘導(dǎo)下，可以誘導(dǎo)培養(yǎng)出具有典型細(xì)胞學(xué)形態(tài)特征的成熟DC。 2.成熟的 DC 表面高表達(dá)其特異性表面標(biāo)志物，并具有較強(qiáng)的抗原

6、提呈功能，可以促進(jìn)TDLNC增殖、分化為具有高度殺傷效應(yīng)性的CTL。 3.經(jīng)自體乳腺癌細(xì)胞凍融抗原刺激誘導(dǎo)的 DC 可以使TDLNC 增殖、分化為腫瘤抗原特異性CTL，針對(duì)自體乳腺癌細(xì)胞具有較高的殺傷效應(yīng)，而對(duì)其他類型的腫瘤細(xì)胞不具有特異性殺傷效應(yīng)。 4.未經(jīng)自體乳腺癌細(xì)胞凍融抗原刺激誘導(dǎo)的 DC 雖也可以使TDLNC增殖、分化為CTL，但此CTL不具有針對(duì)自體乳腺癌細(xì)胞的特異性殺傷效應(yīng)，其對(duì)自體乳腺癌細(xì)胞的殺傷活性