自體腫瘤特異性CTL對(duì)裸鼠乳腺癌模型抑瘤作用的研究.pdf

1、目的：樹突狀細(xì)胞(DC)是人體內(nèi)功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞(APC)。在捕獲腫瘤細(xì)胞后，DC遷移到淋巴結(jié)中將腫瘤抗原提呈給T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)其成為腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)，后者特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。腫瘤引流淋巴結(jié)(TDLN)是位于腫瘤淋巴引流區(qū)的淋巴結(jié)，TDLN中含有豐富的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)采取體外誘導(dǎo)培養(yǎng)乳腺癌患者引流區(qū)淋巴結(jié)細(xì)胞，經(jīng)負(fù)載腫瘤抗原的 DC 激活后，使之成為腫瘤特異性CTL，并回輸同體乳腺癌裸鼠模型中，研究

2、自體腫瘤特異性CTL在裸鼠體內(nèi)對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制和殺傷作用。 方法：手術(shù)時(shí)無(wú)菌摘除乳腺癌引流區(qū)肉眼判斷無(wú)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)2～3枚及瘤組織一塊，同時(shí)無(wú)菌切取另一患者瘤組織一塊，用機(jī)械法獲取淋巴細(xì)胞懸液，離心，以rhGM-CSF、rhIL-4、rhIL-2和TNF-α誘導(dǎo)培養(yǎng)，定期觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，收集部分細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析，使之成為DC和腫瘤區(qū)域引流淋巴細(xì)胞(TDLNC)，然后用自體乳腺癌凍融抗原刺激DC，并和TDL

3、NC共培養(yǎng)，以誘導(dǎo)產(chǎn)生腫瘤抗原特異性CTL；同時(shí)將切取的患者乳腺癌組織剪成約1mm<'3>大小種植于32只3～4周齡BALB/C裸鼠胸墊部皮下建成裸鼠乳腺癌模型，2周后將裸鼠隨機(jī)分成共4組，每組8只。每5天注射一次，①特異性CTL 組(每只裸鼠局部注射抗原特異性CTL5×10<'6>/ml 0.2ml)②非特異性CTL組(每只裸鼠局部注射非特異性CTL5×10<'6>/ml 0.2ml)③異體CTL組(種植另一患者乳腺癌組織，每只裸鼠局

4、部注射非自體抗原特異性CTL5×10<'6>/ml 0.2ml)④空白對(duì)照組(每只裸鼠局部注射生理鹽水0.2ml)，每5天用游標(biāo)卡尺測(cè)量記錄腫瘤長(zhǎng)徑(a)、短徑(b)，按體積(V)=πab<'2>/6計(jì)算腫瘤體積，并計(jì)算腫瘤生長(zhǎng)抑制率，統(tǒng)計(jì)分析移植瘤生長(zhǎng)抑制情況。30天后處死裸鼠取出瘤塊。將腫瘤組織放入福爾馬林溶液中固定、脫水、石蠟包埋切片。常規(guī)HE染色，鏡下觀察腫瘤細(xì)胞形態(tài)：由病理醫(yī)師診斷核實(shí)，免疫組化染色，觀察T淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞

5、浸潤(rùn)情況。 結(jié)論： 1.乳腺癌患者腋下引流淋巴結(jié)細(xì)胞在rhGM-CSF、rhIL-4和TNF-α的誘導(dǎo)下，可以分化為典型的DC； 2.DC具有較強(qiáng)的抗原提呈功能，可以促進(jìn)TDLNC增殖、分化為抗原特異性CTL； 3.自體特異性CTL對(duì)裸鼠體內(nèi)自體移植瘤有較高的抑制作用，為乳腺癌免疫治療提供了理論依據(jù)； 4.病理證實(shí)移植瘤與人乳腺癌相符，且有DC和大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)； 5.該方法建立乳腺癌裸