HIFU治療腫瘤后外周血CTL的特異性抗腫瘤效應(yīng).pdf

1、目的：在前期研究基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步觀察高強(qiáng)度聚焦超聲(highintensityfocusedultrasound，HIFU)治療荷瘤鼠后，外周血細(xì)胞毒性T細(xì)胞(cytotoxicTlymphocyte，CTL)對(duì)同種荷瘤鼠的特異性抗腫瘤效應(yīng)，為闡明HIFU治療腫瘤后外周血CTL對(duì)同種腫瘤的免疫治療作用提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 方法：1、HIFU治療后荷瘤鼠外周血細(xì)胞免疫功能的變化。 60只正常C57BL／6J系小鼠，隨機(jī)分為

2、三組：HIFU治療組(n=2O)、HIFU假照組(n=20)和對(duì)照組(n=20)。前兩組小鼠背部接種H22肝癌細(xì)胞株，成瘤后(接種7天時(shí))分別接受HIFU治療或HIFU假照；對(duì)照組為正常小鼠，不接種腫瘤也不接受HIFU照射。三組小鼠在HIFU治療后第14天采取外周血，流式細(xì)胞術(shù)分析小鼠外周血T淋巴細(xì)胞及亞群的變化。“淋巴細(xì)胞密度梯度離心法”和“免疫磁珠分離法”分離外周血CTL，MTT法檢測(cè)三組小鼠外周血CTL對(duì)H22腫瘤細(xì)胞和S180腫

3、瘤細(xì)胞的殺傷效應(yīng)，ELISA法檢測(cè)外周血CTL與H22細(xì)胞共培養(yǎng)24小時(shí)上清液TNF-α、IFN-γ的含量。 2、HIFU治療后荷瘤鼠外周血CTL的免疫治療作用。 90只正常C57BL／6J小鼠，隨機(jī)分為三組：HIFU治療組(n=30)、HIFU假照組(n=30)和對(duì)照組(n=30)。三組小鼠背部皮內(nèi)分別接種H22肝癌細(xì)胞株懸液0．05ml(6×107個(gè)／m1)。于接種后第3天，三組小鼠分別接受尾靜脈注射HIFU治療、H

4、IFU假照后荷瘤鼠和正常小鼠外周血CTL細(xì)胞1×106／次(2×107／m1)，每天一次，連續(xù)注射2天。隨訪觀察每組小鼠的腫瘤發(fā)生率、腫瘤消退率、腫瘤生長(zhǎng)曲線、轉(zhuǎn)移發(fā)生率、生存率及生存曲線。 3、HIFU活化CTL治療荷瘤鼠后局部免疫效應(yīng)細(xì)胞浸潤(rùn)的變化 90只正常C57BL／6J小鼠，隨機(jī)分為三組：HIFU治療組(n=30)、HIFU假照組(n=30)和對(duì)照組(n--30)。三組小鼠背部皮內(nèi)分別接種H22肝癌細(xì)胞株懸液0

5、．05ml(6×107+／inl)。于接種后第3天，三組小鼠分別接受尾靜脈注射HIFU治療、HIFU假照荷瘤鼠和正常小鼠外周血CTL細(xì)胞1×106/次(2×107／m1)，每天一次，連續(xù)注射2天。CTL治療后第14天，每組分別處死10只小鼠，手術(shù)取出各組小鼠接種部位腫瘤組織塊，Hank's液漂洗后剪成小碎塊，并碾磨過(guò)鋼目篩制成單細(xì)胞懸液，流式細(xì)胞術(shù)分別測(cè)定各組腫瘤組織內(nèi)CD3+淋巴細(xì)胞的數(shù)量。治療后第21天將各組剩余20只小鼠的腫瘤手術(shù)

6、取出，福爾馬林固定，石蠟包埋切片。HE染色后，高倍鏡下用測(cè)微板分別計(jì)數(shù)各組腫瘤局部TIL的數(shù)目。 結(jié)論：1、HIFU治療H22移植性肝癌后，荷瘤鼠細(xì)胞免疫功能明顯增強(qiáng)，外周血T淋巴細(xì)胞受到活化，在體外對(duì)同種腫瘤細(xì)胞具有較強(qiáng)的直接和間接的特異性殺傷活性。 2、HIFU治療H22移植性肝癌后，荷瘤鼠的T淋巴細(xì)胞受到活化，將HIFU活化的CTL過(guò)繼免疫治療同種腫瘤，能明顯改善荷瘤鼠的生存率、生存時(shí)間和腫瘤消退率，減少腫瘤的轉(zhuǎn)移